Re: [求救] 有關 DNA methylation 的實驗
※ 引述《jeffsu (歐巴馬)》之銘言：
: 最近接到老師的新題目想探討轉移基因啟動子的甲基化與癌症轉移的相關性
: 我們將癌細胞處理SAM(NEB) 5days(每天換藥)，收DNA來觀察
: 發現隨者SAM濃度提高，去甲基化的現象反而越來越明顯，而且有dose
: (我們有設計甲基化跟非甲基化primer，甲基化隨SAM濃度上升而下降，非甲基化則上升)
: 而且我們也有放positive control證實primer沒有加錯(只有甲基化primer有出來)
: 於是我接下來用一樣的方法加藥完 收RNA
: 上real-time PCR 也發現轉移基因的表現隨SAM處理而上升
: 跟DNA的結果很符合
: 但問題來了，SAM是一種adomet應該會造成基因的甲基化，使轉移基因的表現下降
: 但我的結果卻剛好相反，重複幾次也確定要濃度沒加錯，想請問板上的高手可能的原因
: 我們是參考這篇paper:Cancer Res 2007; 67: (3). Fbruary 1, 2007
貴實驗室是如何備製SAM的
SAM 本身在水溶液中非常不穩定 會隨著時間增長而degrade 成SAH
而SAH 會inhibit methyltransferase
建議跑個HPLC 確定SAM的純度
NEB賣的SAM 也只有寫80-90%純度
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.64.89
推
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