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[求救] Western 問題～

看板Biotech (生命科學)作者 (癮)時間14年前 (2011/10/07 21:04), 編輯推噓5(5推 0噓 9→)
留言14則, 7人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
請問大家~ 我的蛋白質是一種cytokine 很小(8~14 kd)且量也很少 我用western 來做…..都壓不到band 另外有用ELISA測過，量大約為5000 pg/ml (這是我有overexpression後的) 請問一下~ Western 是因為量太少，所以才壓不出來嗎? 還是western 方面上有哪些地方需要注意的 再來就是， ELISA的結果可以取代western的結果嗎? (因為我想都是測protein表現量) 麻煩大家幫我解決這困擾很久的問題嚕~ 非常感激 -- -- 《生命》 　　　 《就該浪費在美好滴事物上》 -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.226.185
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10/07 21:28, , 1F
trysine PAGE,和.22 memebrane試試看
10/07 21:28, 1F
推
10/07 21:32, , 2F
loading多少protein? 目標很少的話至少要50 ug喔
10/07 21:32, 2F
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10/07 21:32, , 3F
另外二抗不可以染太久
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10/07 21:53, , 4F
trysin PAGE是指用methanol 活化 NC PAPER 嗎？
10/07 21:53, 4F
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10/07 21:54, , 5F
我有用<20kD 的NC PAPER了～
10/07 21:54, 5F
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10/07 21:55, , 6F
protein是放200ug/well 而2抗染1小時
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10/07 21:59, , 7F
sorry,是tricine SDS page
10/07 21:59, 7F
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10/07 22:00, , 8F
給你參考看看 http://tinyurl.com/3c7wkxd
10/07 22:00, 8F
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10/07 22:02, , 9F
還有NC不能放進去100% methanol,會溶解.XD
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10/07 22:03, , 10F
謝謝williamyang~
10/07 22:03, 10F
推
10/07 23:38, , 11F
跑Tricine SDS PAGE
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推
10/08 01:06, , 12F
請問小分子的TRANSFER條件 電壓與時間要怎樣拿捏比較好？
10/08 01:06, 12F
推
10/08 02:03, , 13F
我的目標蛋白10kD，Wet transfer 400mA 1hr效果不錯
10/08 02:03, 13F
推
10/10 18:58, , 14F
之前看protocol說小分子transfer要提高methanol含量到50%
10/10 18:58, 14F
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