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[求救] 細胞一直一直一直汙染...

看板Biotech (生命科學)作者 (緩慢。等待。)時間12年前 (2012/03/31 14:49), 編輯推噓21(21推 0噓 22→)
留言43則, 17人參與, 最新討論串1/1
謝謝大家回覆，昨天跟實驗室學長說好也請大家把細胞先移到其他LAB的INCUBATOR， 接著就是把所有能拆的架子固定條全部拆下來之後酒精先噴一遍+清潔劑再擦一遍接著拿 去照UV一整晚，incubator則是用酒精+清潔劑擦一遍。 之所以會想試著用抗生素殺是因為那時候不管清hood+所有能換新的東西都換新，這東西 還是一直一直出現....才因此有這想法。原本也是採用一發現可疑漂浮物就丟掉細胞， 但是這東西一直出現導致實驗室液態氮桶細胞快絕種了...詢問隔壁實驗室大學長得到以抗 生素殺死汙染的結果才會想說試試看。 至於這汙染，發生的時間點大約是在實驗室新進學生開始學養細胞那段時間開始的.... 反正，不管怎麼樣，我盡力解決了。剩下的.... 有人的地方，就有一堆茶包(茶) 最後還是謝謝大家提供的意見，受益良多!! 最近細胞一直一直一直汙染...而且目前沒有找到可以殺死他的抗生素Q_Q 連隔壁實驗室非常強的抗生素都沒效 囧 他一開始是很像FBS渣渣的短小長條，很容易被忽略。但過了兩三天在看，會發現他變長 了!!再放個兩天，會發現它變多了!!!!接下來就是塞滿整個視野.... 可是很奇妙的是，他不會讓MEDIUM濁掉，細胞也不會死。隔壁實驗室大學長看過之後說是 桿菌類的東西...但是目前加過各種抗生素(Kanamycin, puromycin, 還有隔壁實驗室用過 說讚效果超強的抗生素)都沒用...照樣開心的生長。 這東西好像會黏在dish或細胞上，單純吸掉medium是沖不掉這些東西的，不過用PBS， micropippet朝著細胞沖下去能把這些東西沖掉(只是如果細胞貼附力不強就跟著一起流掉 了..)，但是他還是會繼續長= = 最近又發現除了單條長條狀之外的型態：他會好像從一個中心分岔長出去的樣子。 請問有人知道這是什麼嗎？....這東西困擾我超久>"< 每次挑stable clone都毀在他手上，我快瘋了啊!!! 另外就是有沒有什麼方法可以殺掉這些鬼東西？我已經丟掉好幾盤細胞了..... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.174.188
推
03/31 15:57, , 1F
怎麼感覺很像是我們實驗室以前發生過的，那時是yeast
03/31 15:57, 1F
推
03/31 16:47, , 2F
酵母菌會濁~覺得不用救了 直接丟掉
03/31 16:47, 2F
→
03/31 16:47, , 3F
清潔衛生程序做好比較重要
03/31 16:47, 3F
推
03/31 17:57, , 4F
救細胞幹嘛？全部砍掉重來比較實在。
03/31 17:57, 4F
推
03/31 18:29, , 5F
真菌?
03/31 18:29, 5F
推
03/31 18:31, , 6F
zeocin試試看
03/31 18:31, 6F
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03/31 18:36, , 7F
與其花時間找哪邊出問題 倒不如狠下心全部砍掉全練
03/31 18:36, 7F
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03/31 18:37, , 8F
laminar flow和culture room全部大消毒
03/31 18:37, 8F
推
03/31 19:34, , 9F
真菌汙染 incubator內部都要拆掉滅菌.擦拭
03/31 19:34, 9F
目前都是一發現有，就算只有一點點也是丟掉，但他還是一直出現... 之前清過HOOD，不過還是有。下一步有要清incubator了..學長說等這批藥篩完再說= = (因為我目前在篩的藥有一個氣味之濃烈已經薰滿整個incubator了，他想等篩完再清， 說不然清完還有那個味道他會崩潰 囧> 我想請問清完之後有沒有什麼方法可以預防的，例如水盤加抗菌劑(老師那邊好像有， 跟他拿來家看看)之類的... 實驗室的incubator水盤always乾涸，我想說自己辛苦一點來維持好了..總不能都擺爛吧 = =" 最後謝謝大家回應!!我只是想知道那到底是什麼超難搞又一直出現，沒這東西我的stable clone出來三次了啊啊啊啊啊啊(暴走) ※ 編輯: windyflyer 來自: 111.254.223.221 (03/31 20:16)
推
03/31 20:17, , 10F
細胞汙然怎麼辦? 唯一解:砍掉重練
03/31 20:17, 10F
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03/31 20:19, , 11F
incubator用來蘇擦 蠻有效的
03/31 20:19, 11F
推
04/01 02:15, , 12F
fungus?
04/01 02:15, 12F
→
04/01 02:16, , 13F
大家都覺得是fungus.... 你還在桿菌...
04/01 02:16, 13F
推
04/01 07:53, , 14F
水盤都乾掉裡面溫度無法均勻還養的下去...
04/01 07:53, 14F
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04/01 07:54, , 15F
還有要不要拿你的一點dna加到乾淨medium裡面培養看看
04/01 07:54, 15F
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04/01 07:56, , 16F
不過照理說還要一盤serum free medium一盤PBS一盤有
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04/01 07:58, , 17F
serum的medium.一直污染就要trouble shooting, 埋頭
04/01 07:58, 17F
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04/01 07:58, , 18F
苦幹就算最後殺掉那些污染 篩出來的細胞也不會是你想
04/01 07:58, 18F
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04/01 07:58, , 19F
要的
04/01 07:58, 19F
推
04/01 11:15, , 20F
對阿說不定是PBS 或medium之類的被汙染了
04/01 11:15, 20F
推
04/01 11:15, , 21F
別等了....拖也是拖你自己的時間罷了 不如趕快解決
04/01 11:15, 21F
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04/01 11:15, , 22F
再重新來篩
04/01 11:15, 22F
推
04/01 12:25, , 23F
整批換新的比較快...
04/01 12:25, 23F
推
04/02 02:22, , 24F
不會troubleshooting 這個碩士學位拿到也是廢的
04/02 02:22, 24F
推
04/02 10:26, , 25F
樓上也不必這樣 很多實驗上要抓問題是靠經驗的 拿到學位
04/02 10:26, 25F
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04/02 10:27, , 26F
之後再久 做新的實驗時也可能很久抓不到問題 這樣就覺得
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04/02 10:28, , 27F
學位廢的也太快了點 去請教一個只有沒拿到MD和PhD但做這
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04/02 10:29, , 28F
個實驗有多年經驗的人反而快很多
04/02 10:29, 28F
推
04/02 11:23, , 29F
經驗當然很重要 沒經驗的時候就是從基本shoot起
04/02 11:23, 29F
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04/02 11:25, , 30F
基本動作都做了還是有問題也不是不會發生
04/02 11:25, 30F
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04/02 11:25, , 31F
但這篇是類似暴力破解阿
04/02 11:25, 31F
推
04/02 11:53, , 32F
細胞培養應該是最簡單的技術，該不會是新手。
04/02 11:53, 32F
推
04/02 18:29, , 33F
加抗生素想殺死汙染源的做法真的不太好 不如是在重配
04/02 18:29, 33F
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04/02 18:29, , 34F
與重新養的medium中加入抗生素還比較好
04/02 18:29, 34F
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04/02 18:30, , 35F
有很多抗生素都只是抑制生長而已....
04/02 18:30, 35F
推
, , 36F
同上,抗生素抑制生長讓你沒注意,發現時就是沒效爆發了
※ 編輯: windyflyer 來自: 111.254.212.86 (04/03 21:57)
推
04/04 00:43, , 37F
不加P/S反而不容易汙染 因為一有汙染馬上就會知道
04/04 00:43, 37F
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04/04 00:44, , 38F
加了往往只是掩蓋汙染的事實 就像抹了濃妝的女人不知真面目
04/04 00:44, 38F
推
04/04 03:00, , 39F
幾乎沒再用PS+1
04/04 03:00, 39F
推
04/12 01:02, , 40F
我覺得是DNA髒
04/12 01:02, 40F
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04/15 21:40, , 41F
你有提到水盤時常乾固,那就是因為水盤乾了水中的水黴
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04/15 21:41, , 42F
隨著循環被吹入DISH中,這問題我遇過很多次,後來維持
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04/15 21:43, , 43F
水盤的水量且定期更換就沒再出現過成絲分岔狀的黴菌
04/15 21:43, 43F
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