Re: [求救] PCR無法放大片段
※ 引述《adamada (soso)》之銘言：
: 手上有一對primer
: 如果是用Plasmid當template的話
: 這對primer是可以使用
: 但如果把plasmid放大的產物經由Gel-extract後
: 拿來再次放大
: 卻無法有產物!!!而只有Smear.....
: 請問有什麼方法可以解決嗎??
如題以你純化過的的PCR產物當template 50ng
假設是1000bp 分子量以660000計算,PCR總反應體積 20ul
那你的template的濃度大概接近 4 nM
如果你的primer下 500 nM
理想情況下,不出 7 個 PCR cycle primer 就用盡了
7個cycle才放大幾百倍而已,在準備PCR反應時template搞不好就稀釋10倍了=.=
還有因為template過多,很多都是只p上一端的半成品,兩條primer要夾出來的機率也少
所以你的PCR結果是smear還滿正常的
plamid或PCR產物當template 10~100 pg就夠了
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