[求救] 抽RNA和Q-PCR相關問題
有些問題想請教，抽RNA的最後一步是用75% DEPC-H2O 配的75%酒精
之後，倒扣讓它乾，這時候大家會放多久呢?
實驗室的學姐說，她不敢讓它放超過20分鐘，不然太乾會很難溶，
但是我的狀況是
，最後eppendorf裡都會剩一滴水珠的部分，
這水珠到底是酒精??還是只剩下水???
因為這次，我十多個sample，細胞數約5*10^6抽RNA，
結果就一管，我看它裡面有水珠，特地拿10ul pipet吸，
結果它的濃度最低，只有50ng/ul，其他至少都200ng/ul，
有人有遇過嗎?
另外q-pcr，一定要差1.5倍 or 2~3倍以上才是真的有差異嗎?
我是primary culture的細胞，要比較有hypoxia跟沒有，target gene表現有沒有變化
還有我用Sybr green跑的時候，GAPDH,target gene, NTC 共40 cycles,
no-template control(NTC)都沒signal，
但是用TaqMan，大概在36-37cycles NTC都會友signal，這是正常嗎?
謝謝回答
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.72
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sorry, 我有些地方打錯，是我總共跑40cycles，不是GAPDH跑到40才有訓號
但如果我做三次，不是指三重複，是整個實驗，養細胞，hypoxia...，repeat三次，
然後三次Q-PCR 分析Ct值後，差異倍數變化從1.1-2.2 或從1.4-1.7倍的差異
這樣要算是有變化還是沒變化???
會有人argue說，這才1.x多倍的增加，一定不是真的 嗎??
※ 編輯: pent 來自: 140.109.40.72 (04/03 23:01)
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