[求救] High Range DNA Ladder
第一次在此板發文，文似乎有點長
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自從Clone了大小有15kb之譜的質體成功之後
就跟老闆請求訂購可以訂出10kb以上的DNA marker
訂的是「Thermo GeneRuler High Range DNA Ladder」
一直以來實驗室都只有用過1kb、100bp的DNA marker
因為兩種marker的用法大同小異(1kb用1% agarose gel、100bp用2% agarose gel)
當High Range DNA Ladder送來的時候，他是需要自行添加6X loadding dye的
而說明書上也有建議的比例配法，而使用的Gel也建議0.4%
因為製膠檯有限，怕會混淆其他人使用，所以先使用了1% gel下去跑100V,1hr左右
結果跑出來發現Marker並沒有被跑開，整個是混在一起的
(有以1kb下去做對照，1kb是成功跑開了)
之後只好配置一批0.4%的Gel再跑一次100V,1hr，還是無法跑開
之後試過用了50V去跑1hr，結果是一樣的
在此提供一下說明書上的建議
「1X TAE」、「0.4%(low percentage) agarose gel」
「3V/cm 1.5h」、「0.4ug/lane」、「8cm length gel」
我們實驗室用的一直是1X TAE、0.4% Gel有另外配過、
3V/cm則是因為機器的關係只有50V和100V可以選擇，
0.4ug/lane的量一直是夠的
整個有差別的則是 8cm length gel，
由於器材的關係，我們實驗室只能配的出小於8cm 的膠
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我想請問，
對於我使用了這種大範圍的DNA marker的方法上還有甚麼遺漏的地方
除了8cm gel比較不太可能配的出來之外，
有辦法使用現有的器材讓他漂亮的跑開嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 111.252.105.63
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04/04 23:43, , 1F
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04/05 00:09, , 2F
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04/05 00:10, , 3F
04/05 00:10, 3F
是運氣好剛好挑到成功的
pBR322(4K)+Neomycine gene(1.5k)+DsRed(0.7k)+Viral Nonstructure protein(9K)
有試過以0.4% gel 100V 跑上1h20min左右(放著跑去買午餐)，
整個Band已經跑到膠的四分之三處，但是還是無法跑開他們
※ 編輯: fvf 來自: 111.252.105.63 (04/05 03:30)
推
04/07 23:11, , 4F
04/07 23:11, 4F
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