[求救] Ecoli內質體含量過少

看板Biotech (生命科學)作者 (poulnew)時間12年前 (2013/04/26 02:00), 編輯推噓2(203)
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最近從中研院購入shRNA,且含2組 negative control(shGFP,shRFP) 目前一切正常,惟有這兩組negative control(shGFP,shRFP)無論麼抽 所得到的plasmid產量都大概是實驗組的1/5而已,所有培養& mini prep.的條件都 與實驗組一樣 [incubate 16-18h+shakeing 200rpm / TB(Amp plus100ug/mL / Qualegen kit] 可以確定的是,我已經將抽mini菌液的量提高到4mL,也確定離下來的菌非常多。 但是抽出來的量還是低於實驗組,最近即將要抽大量,想在抽大量前解決此事。 剛爬文後有些頭緒,但還是麻煩各位先進再給個建議。 1.是否為菌種老化,但菌種老化不是跟生長速度有關?會造成質體產量過少嗎? 2.抽質體時P1,P2,P3體積拉大,讓lyse效果增加?? 純粹個人想法 最後想問,是否有實驗室剛好有negative control shRNA菌種,可否分一些給我培養。 ps我人在台北石牌這 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 180.176.8.224

04/26 02:42, , 1F
看起來只是取stock菌液放大,而不是重新挑single吧
04/26 02:42, 1F

04/26 08:43, , 2F
1.其實會 2. 4ml真的太多,要馬放大buffer要馬減少菌液
04/26 08:43, 2F

04/26 08:44, , 3F
或是另外streakout,如一樓b大所言重挑吧
04/26 08:44, 3F

04/26 08:45, , 4F
又...其實這類型菌株當初都有簽MTA,原則上不能贈予
04/26 08:45, 4F

04/29 16:24, , 5F
不是可以直接買vector?
04/29 16:24, 5F
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