Re: [求救] Ecoli內質體含量過少

看板Biotech (生命科學)作者puec2 ( .＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿.)時間12年前 (2013/05/24 12:37)推噓2(2推 0噓 2→)

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※ 引述《poulnew (poulnew)》之銘言： : 最近從中研院購入shRNA，且含2組 negative control(shGFP,shRFP) : 目前一切正常，惟有這兩組negative control(shGFP,shRFP)無論麼抽 : 所得到的plasmid產量都大概是實驗組的1/5而已，所有培養& mini prep.的條件都 : 與實驗組一樣 : [incubate 16-18h+shakeing 200rpm / TB(Amp plus100ug/mL / Qualegen kit] : 可以確定的是，我已經將抽mini菌液的量提高到4mL，也確定離下來的菌非常多。 : 但是抽出來的量還是低於實驗組，最近即將要抽大量，想在抽大量前解決此事。 : 剛爬文後有些頭緒，但還是麻煩各位先進再給個建議。 : 1.是否為菌種老化，但菌種老化不是跟生長速度有關?會造成質體產量過少嗎? : 2.抽質體時P1,P2,P3體積拉大，讓lyse效果增加?? 純粹個人想法 : 最後想問，是否有實驗室剛好有negative control shRNA菌種，可否分一些給我培養。 : ps我人在台北石牌這這個很好解決啦答案就是 1. 你的菌種在TB裡面可能長太快聽到離下來的菌"非常多"就知道不妙了老化的菌裡面的plasmid量的確會減少我以前還遇過完全抽不出東西的用掉了兩盒MIDIPREP KIT 怎麼抽就是沒東西菌量也"非常多" 解決方法就是縮短培養時間縮短到12小時我現在用的條件甚至 10小時就可以抽miniprep. 只不過要用特殊kit :) 這真的是一個很打擊信心的實驗問題因為你一切都照procotol做嚴格要求自己要養16-18小時但是抽不出來就是抽不出來你實驗組的plasmid可以拿到的原因可能是你的菌帶有實驗組plasmid 生長速度會比較慢所以16-18小時以後還有足夠的plasmid 但其實如果你縮短培養時間說不定可以拿到更多的plasmid. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.175.170