Re: [求救] 關於測collagen含量

看板Biotech (生命科學)作者dddd77915 (拉拉)時間11年前 (2014/02/12 12:11)推噓0(0推 0噓 0→)

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我後來買了takara的procolagen type I c-peptude (PIP) EIA kit 取上清(不含FBS)不用處理但須適當稀釋直接Load入kit coating 好的well 然後再照步驟添加試劑反應整體滿簡潔好用的 kit有附標準品可以做標準曲線我有測出來，但趨勢有點... 總之提供你做參考囉 ※ 引述《haaaaaa (work hard work smart)》之銘言： : 標題: [求救] 關於測collagen含量 : 時間: Mon Nov 18 09:46:24 2013 : : 最近用6cm dish養fibroblasts並打算抽取其上清及ECM中的collagen，不過遇到了困難，想在這裡請教各位前輩，有沒有什麼特別需要留意的地方…以下是我follow一篇paper中方法：以0.05M acetic acid將細胞刮下，並加入10mg/ML pepsin，4度反應隔夜，接著使用10000 rpm離心10分鐘，取上清，並加入3倍體積之neutralization solution (200mM Tris,150mM NaCl)，最後將處理好的sample以USCN collagen type I ELISA kit進行測試。 : 可是一直測不到～陸續査了許多不同protocol ，有些提到要再用pancreatic Elastase處理並用硫酸銨沈澱。 : 也看過其他kit，前處理sample的方法大致與上述雷同。（當初是因為懶惰，看到USCN沒有標明任何需要sample前處理的步驟，覺得好像很方便就買了…） : 希望版上各位前輩能撥冗傳授我一些該注意的事項～謝謝！！ : : By 好想測到collagen的人 : : P.s.手機排版有點失控，辛苦各位了～感謝耐心看完～ : : : -- : ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) : ◆ From: 42.70.62.200 : 推 dddd77915:我也正在測，但還在想要用哪個方法。如果是買ELISA是否 11/18 11:29 : → dddd77915:有標準protocol 可以參照?你用哪家哪個貨號的? 11/18 11:30 : → haaaaaa:我目前是用MDbioproduct的kit(M036007)，我follow它的 12/25 14:30 : → haaaaaa:protocol抽出collagen，測定時順便測前處理有用到的 12/25 14:31 : → haaaaaa:solution(acetic acid和TBS)結果前者有matrix effect~ 12/25 14:32 : → haaaaaa:我覺得很怪~不知道有沒有人用這個kit成功測得過耶~感謝!! 12/25 14:32 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.4.199