[求救] 關於測collagen含量
看板Biotech (生命科學)作者haaaaaa (work hard work smart)時間12年前 (2013/11/18 09:46)推噓1(1推 0噓 5→)留言6則, 2人參與討論串1/2 (看更多)
最近用6cm dish養fibroblasts並打算抽取其上清及ECM中的collagen，不過遇到了困難，想在這裡請教各位前輩，有沒有什麼特別需要留意的地方…以下是我follow一篇paper中方法：以0.05M acetic acid將細胞刮下，並加入10mg/ML pepsin，4度反應隔夜，接著使用10000 rpm離心10分鐘，取上清，並加入3倍體積之neutralization solution (200mM Tris,150mM NaCl)，最後將處理好的sample以USCN collagen type I ELISA kit進行測試。
可是一直測不到～陸續査了許多不同protocol ，有些提到要再用pancreatic Elastase處理並用硫酸銨沈澱。
也看過其他kit，前處理sample的方法大致與上述雷同。（當初是因為懶惰，看到USCN沒有標明任何需要sample前處理的步驟，覺得好像很方便就買了…）
希望版上各位前輩能撥冗傳授我一些該注意的事項～謝謝！！
By 好想測到collagen的人
P.s.手機排版有點失控，辛苦各位了～感謝耐心看完～
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 42.70.62.200
推
11/18 11:29, , 1F
11/18 11:29, 1F
→
11/18 11:30, , 2F
11/18 11:30, 2F
→
12/25 14:30, , 3F
12/25 14:30, 3F
→
12/25 14:31, , 4F
12/25 14:31, 4F
→
12/25 14:32, , 5F
12/25 14:32, 5F
→
12/25 14:32, , 6F
12/25 14:32, 6F
討論串 (同標題文章)
以下文章回應了本文：
完整討論串 (本文為第 1 之 2 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
23
45