[求救] 請高手幫忙看看這幾張Annexin V/7AAD圖

看板Biotech (生命科學)作者truthPP (就是真理)時間12年前 (2013/09/24 01:26)推噓0(0推 0噓 0→)

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大家好詳細圖檔於下列網址內 http://ppt.cc/N7Cy (如果PCMAN開不了換至Google chrome應該ok) 實際的實驗內容我在先前annexin V/7AAD的提問(15388篇)中有說明今天做完的結果感覺好像設定上還是沒抓到竅門所以前來請有做過Annexin V/7AAD的高手指導一下先簡單說明圖中各項組別 (A)未染色的活細胞Control (B)照射UV後4小時的細胞單染Annexin V (C)照射UV後4小時的細胞單染7-AAD (D)雙染Annexin V及7-AAD的活細胞Control 上述四組用於調整設定 (E)照射UV後4小時的細胞雙染Annexin V以及7-AAD (F)加入誘導凋亡藥物5nM兩小時後的細胞雙染Annexin V以及7-AAD (G)加入誘導凋亡藥物50nM兩小時後的細胞雙染Annexin V以及7-AAD 上述三組為實驗組 Flow上機後調整的方式為 1.先上未染色活細胞control(形成A圖) 目的:調整FSC/SSC以及FL2跟FL3至理想區域及象限 2.上照射UV後4小時的細胞單染Annexin V 目的:調整FL3-FL2 compensation 3.上照射UV後4小時的細胞單染7-AAD 目的:調整FL2-FL3 compensation compensation最終設定大約值是 FL3-FL2=14% FL2-FL3=28% 4.上雙染Annexin V及7-AAD的活細胞Control 目的:確認十字範圍設定baseline 5.完成設定後依序上後續實驗組跑完後對data的疑問 1.照射UV的細胞感覺好像沒甚麼死= = 在跑UV單染的圖出來時當下的反應是 X!(消音)不會沒染上吧? 但後來看到藥物組的圖形有出來感覺應該是有染上反而更疑惑UV組到底出甚麼問題 2.UV部分的Data感覺細胞群好難抓所以先沒有gate 不知道這邊的細胞能Gate哪一塊區域? 3.實驗的組別設計上不知道大家看完有沒有覺得哪邊有問題? 會不會是實驗組別設計上(特別是調整設定哪幾管)的問題才會導致圖形變這樣 4.一般來說染色的時間大家大概最長到多少? 我從下Annexin V/7AAD到上機是15分鐘目前這組DATA唯一給我的好消息是如果他是OK的那藥物組(G)可能就是我要的條件但那也要DATA是OK的 T皿T 而且看到UV組的圖是那樣好像都還活得好好的感覺冏希望大家能對我設定上以及實驗組別設計的部分給我建議因為這細胞凋亡條件對我來說很重要懇請大家幫忙先跟大家說聲謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.66.223 ※ 編輯: truthPP 來自: 120.126.66.223 (09/24 01:26)