Re: [問題] 關於western blot 系統相關問題

看板Biotech (生命科學)作者 ( )時間12年前 (2013/11/13 04:54), 編輯推噓4(4011)
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※ 引述《metaoo (阿威)》之銘言: : 各位大大你們好 : 最近實驗室有想要購買western blot的系統 : 想要購買bio-rad的系統 想買副廠牌 : 詢問到有 凱元 cavoy 與 天能 tanon 兩個牌子 : 價格上是有點差異 cavoy較貴 : 但聽說tanon 有很嚴重的品管不良的問題,塑膠片跟玻璃都會很常有狀況 : 不知道各位大大有無使用過這兩個系統 : 或是有何推薦的其他選項? : 謝謝大家! 其實副廠(或A貨)與原廠使用雖類似,搭配上是有些微差異 但是通常有問題跟sales討論不見得會引起注意 所以在這裡回文討論一下差異性 我們最早用的是Bio-Rad原廠,但是後來陸續添購一些非原廠零件 因為這是依照自己lab偏好所做的選擇,所以就不特別指明那個牌子了 有任何細節請自己搜索比較,這裡姑且以A牌稱呼 首先是外觀,Bio-Rad已經改成4-cell樣式了,但A牌還是2-cell 如果自家單次跑膠量常有規模,選用A牌就會產生困擾 但相對地,當一般lab常會把前次內部TGS buffer放外部reuse 在傳統2-cell內外替用下益損平衡,但4-cell則是需要更多buffer 像我們lab多數被2-cell制約,因此4-cell常被晾在一旁不得以才會使用 配件方面: 製膠固定架(casting stand) Bio-Rad是一架適用兩組,但A牌是一架鑄一組膠 如果會像我們實驗室常為了實驗打架,後者使用上比較彈性 製膠支架(casting frame) Bio-Rad很耐用,我們除了2/8組出現左右轉軸斷掉外,往外壓緊玻璃時不會卡卡的 A牌則是太常斷掉損壞,約每一季就壞一個,還好這個有更換新品的終身保固 鑄膠墊片 Bio-Rad的新品還算堪用,但如果用完後沒清洗收整,很容易會起"水泡" 通常這樣就會導致漏膠的情況 A牌的材質完全不一樣,就算用好一陣子也不容易出現漏膠 目前我們只有遇過用就之後會出現裂縫並會越來越長,進而增加漏膠情況 這時候就只能限定用另一面 不過A牌的小缺點是新品太黏沒事卡一堆灰塵又造成收整的不便 長、短玻璃 只要是玻璃就有機會被打破,抑或實驗做久難免敲到缺角 原廠玻璃雖然很仔細修邊,但價格不親民,是最早被我們以他牌汰換掉的 而A牌雖然略微便宜,但長玻璃的兩邊黏合技術不好(不過我們Bio-rad也壞過3片) 所以只要鬆掉也是永久換新(據說A牌已經改善技術,但我們目前還是持續換新中) 而鑄膠細節方面,當我separating gel高度設定在綠色製膠支架上橫條下緣時 Bio-rad的gel體積需要8ml,而A牌則是7.6ml 因此同樣號稱1.5mm長玻璃,兩者應該略有差異 而且A牌可能隨著生產批次不同,體積有從7.6~7.4ml之間變化 顯示其品質的不穩定(可是A牌不讓我以這個理由更換長玻璃,我只好努力鬆掉它) 而目前我拿到的新品似乎穩定在"7.6ml體積"了,希望以後不要再變 1.5mm齒梳(comb)/15 wells 外觀上,Bio-Rad每一齒的寬度大,也就是齒間細縫小,A牌則是相反 故原廠在1.5mm可以容納較多的loading體積 不過以我個人則是偏好每個band之間粒粒區分開的感覺 另外原廠齒梳厚度似乎與原廠玻璃會比較搭配,反之亦然 原廠齒梳使用在A牌玻璃組,反而會略嫌太緊 可是以上若是沒有仔細比較過,應該不太容易察覺出明顯的不同 而轉漬方面: 白色冷卻盒(cooling unit) Bio-Rad先前改良過後中間有間隔隔開,可是我們用沒多久就紛紛出現裂縫漏水 (或許是裡面水放太多,或者我們比較衰) 現在新的Bio-Rad是一整個藍色液體冷卻盒,或許就沒有上述困擾了 而A牌則是沿用Bio-Rad更舊款,只是盒子厚度上有些加強並增加顆粒感有防濕滑效果 因此lab裡面多偏愛取用此款 海綿墊(fiber pad) 好像沒得比,Bio-Rad低調黑色款,久用又不會變薄 就算吸水力不夠,丟在TG buffer裡面也沒什麼好擔心的 當原廠產品的越益進化,就使得我們的習慣與偏好跟原廠漸漸疏遠 如果實驗室沒有經費上的限制而仍把他牌列入考慮 那採購時或許就可以多著重使用習慣(感覺)這一點 -- 因應三星條款,以上的內容純屬使用心得分享 器材配件都是實驗室經費購置 我或我們lab沒有收受上述提及單位的具針對性的任何贈禮或補助 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 180.218.152.101

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寫的很仔細, 推! 我是用Bio-rad原廠, 但用Hoefer的轉漬
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11/13 08:58, , 2F
系統, 使用上感覺Hoefer的轉漬效果比較好 (純粹個人感覺)
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11/13 09:00, , 3F
推,不過一切都是使用手感問題,敝實驗室原廠貨居多,
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但也是有同仁喜好使用A貨,不過fiber pad的優劣倒相當明顯
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玻璃部分,A貨的spacer非常容易脫落,黏合不佳。
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另A貨的cooling unit會變形,要注意內容液體的量
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還有一個有趣的東西,就是running gasket的U-shaped rubber
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敝實驗室有大量蟑螂會啃咬,換A貨反而不會被咬,見鬼了
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大推 但是個人喜歡Hofer
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另外有蟑螂問題,請上網搜尋--拜沛達。
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bio-rad sales建議用水壓膠 IPA似乎會傷害到長玻璃兩側
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以上訊息來源是最近買 4 cell 時 sales說的
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更精確的說就是, IPA會對長玻璃兩側的黏著劑產生影響
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用水好不好看試過就知道,我知道大多用MeOH或EtOH,而非IPA
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而原廠網頁只有提到不建議用butanol或isobutanol
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