Re: [求救] Hematoxylin染神經細胞核
※ 引述《derren (我想要ㄉ幸福M)》之銘言：
: 跪求各位高手~
: 我們的實驗是做primary cortical cell 有混和的神經細胞及神經膠細胞
: 最近在做DAB染色 利用hematoxylin做counterstain 染細胞核
: 可是發現細胞單染hematoxylin時就會有像neuron的細胞型態出來
: 如圖http://ppt.cc/GIXH 可以看到深色細胞核還有軸突或樹突的型態
: 導致在染NeuN (neuron marker)時根本無法分辨哪一些是positive cell
: 算positive cell時會多算很多
: 我有試用改用螢光染色染dapi跟NeuN 結果NeuN根本沒那麼多
: 如何解決hematoxylin會染到像神經細胞的型態呢?
: 還是他本來就不適用染神經細胞? 有什麼可以替代的方法呢?
: 謝謝大大!!
剛看了一下
把你的圖重新白平衡後是這樣
http://ppt.cc/xpVD
說真的 這個視野下的神經細胞核基本上我可能會判定沒有上
有上的是細胞質 還有旁邊的microglia cells
如我剛剛推文裡講的 DAB和Hematoxylin是兩種色系
用肉眼判讀理論上除非染過頭都變黑 不然都是有辦法判讀
如果是用電腦判讀就更簡單 直接把該色系挑出來 然後神經細胞核大小會比microglia大
這樣就很好判讀
如果這樣還很困擾你 你可以試試hematoxylin再染短一點時間
或是乾脆換成孔雀綠好了...
同時回答你螢光染色的問題 基本上我看你這張IHC的我都覺得沒什麼NeuN陽性了
所以螢光染色應該也不會多到哪裡去 所以你染色可能技術沒問題
只是判別上不熟悉罷了
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