[求救] 新買的NC膜泡到buffer會變波浪狀

看板Biotech (生命科學)作者REIDO (NEET)時間11年前 (2014/10/02 23:35)推噓5(5推 0噓 6→)

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我之前和北極光買了新的Amersham的NC membrane http://ppt.cc/S99S http://ppt.cc/PnIg 原本裡面是用鋁箔袋裝的，光是拿出來就要費很大的勁。我和學弟各自切了自己要用的份，就各自用各自的。不過真正讓我傻眼的是，一放到transfer buffer裡面，就變成波浪狀了。 http://ppt.cc/pAMk http://ppt.cc/INwI 實際用UVP拍可見光。 http://ppt.cc/Wn42 http://ppt.cc/XSfw 左邊是Amersham的NC，右邊是PVDF。可見光可以看到中間的NC有奇怪的痕跡， NC中間較大的那張靠右也有痕跡只是較輕微。實際觀看的感想，有點像是好幾層紙疊在一起，但是中間有幾張有裂縫或是水痕的感覺。 http://ppt.cc/yBsP http://ppt.cc/D21D 結果ECL一加上去，N-cadherin中間就亂成一團，相對右邊的PVDF就好很多。拿出來看就會注意到ECL沒有均勻蓋上，NC很明顯會凸出來。就算把ECL 加滿也一樣(雖然有人不建議，但是我們實驗室一直以來蓋滿ECL都沒有問題)。接下來是另一次的NC結果，左右都是NC。 http://ppt.cc/PQO5 http://ppt.cc/-aND 看最大張的部分，左右兩組都有和上面一樣奇怪的水痕，左邊那個原本就幾乎沒訊號，而右邊也有不均勻的現象。 http://ppt.cc/CUvd http://ppt.cc/3Ju3 上面是冷光，下面是和白光疊合，右邊上面的訊號消失了。中間和右邊的兩張，其實是上一組最右上邊的膜，我剪開後繼續染兩個抗體。訊號消失的位置一樣。我猜在曝光時間長的時候，膜凹凸不平造成ECL分布不均，可能會是出事的理由之一，另外那個痕跡也可能是NC內部結構已經損壞，會不會造成較大的縫隙讓protein抓不夠，或是反過來卡雜質就無法判斷了。請問有人有買同一牌的NC膜嗎？有沒有遇到同樣問題，這要怎麼解決？ -- 小黃小黃別生氣，明天帶妳去看戲。我坐椅子妳坐地，我吃雞腿妳啃骨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.137.69 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1412264151.A.890.html