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[求救] western的膜在blocking的時候乾了

看板Biotech (生命科學)作者 (太人生了)時間10年前 (2015/04/22 11:10), 編輯推噓15(15推 0噓 26→)
留言41則, 11人參與, 最新討論串1/1
western的膜在blocking的時候蒸發太多, 乾掉了 請問有任何補救措施嗎.. -- -- 推 pen88:以前覺得 鬼塚22歲還是處男很好笑 現在我笑不出來 10/19 01:47 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.96.58 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1429672227.A.75C.html
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04/22 11:13, , 1F
用甲醇再活化後wash 這樣應該是OK
04/22 11:13, 1F
推
04/22 13:18, , 2F
沒關係的～再加ㄧ點牛奶讓他濕就好了！
04/22 13:18, 2F
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04/22 13:59, , 3F
因為放ON, 早上來看旁邊還有中間部分乾乾的
04/22 13:59, 3F
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04/22 13:59, , 4F
後來再泡到transfer buffer 想說裡面有甲醇
04/22 13:59, 4F
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04/22 14:00, , 5F
現在乾掉的地方 即使浸溼了還是是痕跡
04/22 14:00, 5F
推
04/22 14:56, , 6F
Blocking overnight不會把想測的抗原也遮蔽掉嘛0.0?
04/22 14:56, 6F
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04/22 14:56, , 7F
Blocking overnight不會把想測的抗原也遮蔽掉嘛0.0?
04/22 14:56, 7F
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04/22 14:56, , 8F
重覆推文，不好意思><
04/22 14:56, 8F
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04/22 15:12, , 9F
之前做的時候 是OK的 單一band蠻漂亮的
04/22 15:12, 9F
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04/22 23:57, , 10F
回h版友 做過4度C overnight 不會有影響 只是如果用牛奶不
04/22 23:57, 10F
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04/22 23:59, , 11F
建議blocking 超過太久 初心者時放六日 結果牛奶有點臭掉還
04/22 23:59, 11F
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04/23 00:00, , 12F
有點分離......囧
04/23 00:00, 12F
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04/23 00:01, , 13F
^不要超過太久
04/23 00:01, 13F
推
04/23 17:47, , 14F
了解~
04/23 17:47, 14F
推
04/24 13:42, , 15F
一樓的你是想害死人嗎
04/24 13:42, 15F
推
04/24 14:30, , 16F
樓上怎麼說@@?
04/24 14:30, 16F
推
04/25 21:30, , 17F
一樓沒說錯阿 我transfer完或是blocking後都有做過
04/25 21:30, 17F
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04/25 21:30, , 18F
把膜晾乾 收在防潮箱(室溫) 等到要用時再用甲醇活化
04/25 21:30, 18F
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04/25 21:31, , 19F
只是我不知道blocking中途乾掉是不是會有blocking不均
04/25 21:31, 19F
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04/25 21:31, , 20F
的現象 如果是我的話 會把膜晾乾用甲醇重新復水後
04/25 21:31, 20F
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04/25 21:32, , 21F
再blocking30分吧(但我沒這樣做過喔 只是鍵盤分析...)
04/25 21:32, 21F
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04/25 21:33, , 22F
對了...僅限於PVDF 如果用NC 不可以過100%甲醇的 會溶
04/25 21:33, 22F
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04/26 13:47, , 23F
痾..我是很認真回答..而且我真的有這樣做過
04/26 13:47, 23F
推
04/27 04:20, , 24F
PVDF 跟一樓一樣作法過
04/27 04:20, 24F
推
04/27 20:16, , 25F
剛做完一樓的方法壓p-akt band超棒
04/27 20:16, 25F
推
04/30 17:35, , 26F
blocking完以後把膜晾乾 用甲醇重新復水 再染?
04/30 17:35, 26F
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04/30 17:36, , 27F
染得到東西??
04/30 17:36, 27F
推
05/01 00:03, , 28F
1F說的沒錯，把PVDF說明書就有寫到。membrane乾燥後保存一段
05/01 00:03, 28F
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05/01 00:05, , 29F
時間，拿出來用Methanol活化，就能再使用，我就這麼做過~
05/01 00:05, 29F
推
05/07 10:20, , 30F
blocking完以後把膜晾乾 用甲醇重新復水 可以染到
05/07 10:20, 30F
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05/07 10:20, , 31F
因為我做過所以肯定
05/07 10:20, 31F
推
05/08 15:07, , 32F
所以你們都跑一次膠 可以染N種抗體?
05/08 15:07, 32F
推
05/25 00:25, , 33F
一張壓個10隻抗體都行了吧
05/25 00:25, 33F
推
05/27 00:38, , 34F
重複壓 還是需要stripping吧??? 只是方便 不用再跑膠??
05/27 00:38, 34F
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05/27 00:38, , 35F
還是甲醇過完後 就不用stripping呢??
05/27 00:38, 35F
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05/27 00:39, , 36F
這樣壓p-akt會比沒風乾的壓好嗎?? 真的好奇 之後要做>"<
05/27 00:39, 36F
推
05/28 01:42, , 37F
p-akt兩個form我還是會分2張跑 否則會被argue strip
05/28 01:42, 37F
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05/28 01:42, , 38F
不均勻造成差異
05/28 01:42, 38F
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05/28 01:43, , 39F
還有我是不小心讓membrane乾了 才水球一樓k大求救的
05/28 01:43, 39F
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05/28 01:44, , 40F
還是讓他保持濕濕的囉
05/28 01:44, 40F
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05/28 01:45, , 41F
我做出來 膜乾的跟沒乾的訊號差異不大
05/28 01:45, 41F
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