Re: [求救] SDS-PAGE sample太黏稠 很難沉到well底部
※ 引述《smallmin (小明)》之銘言：
: 我今天在跑SDS-PAGE
: sample是E. coli expression total protein
: 就是取1 ml菌液 5000 g 離心1分鐘
: 去上清液 加入80 ul 2X sample buffer
: 100C 煮5分鐘 煮完spin down
: 冷卻後直接load到well 不分可不可溶
: 每個well load 10 ul
: 我有一部份sample可能因為菌量太濃
: sample非常濃稠 tip會被堵住 很難吸取
: 我用12,000 rpm 離心 1分鐘
: 還是沒有pellet沉澱
: 直接load到well 因為太黏稠 sample裡面有氣泡
: 氣泡被包在sample裡 很難除掉
: 導致sample會從well裡浮上來 沉不下去
: 請問各位遇到這種狀況怎麼處理?
: 如果我換4X或5X sample buffer會比較好嗎?
: 謝謝
濃稠應該是因為genomic DNA 的關係
你可以取少一些，我覺得1mL可能太多了
還有以前我經驗是煮完不需冷卻直接load即可
這樣比較不會濃稠
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