[求救] qPCR做不出做不出預期結果?
看板Biotech (生命科學)作者hachibuya (黃金騎士 牙狼)時間9年前 (2015/11/25 16:37)推噓11(11推 0噓 12→)留言23則, 9人參與討論串1/2 (看更多)
我實驗室在測某種藥物加到癌細胞後和放射線治療的關係
藥物的廠商有幫我們做DNA的microarray
跑出來後蛋白質fibronectin有很明顯如預期的差異
(沒加藥global normalization為428, 加了藥的降到215)
因為只有microarry的data感覺很虛
所以老師說用realtime qPCR跑看看
我們的機器是Roche的LightCycler Nano
一開始是用SYBR GREEN染, 對照組是用18S
結果不同時間養的細胞做出來的結果很不一
(對照組和加藥組間的結果很不穩定 有時算出來是對照組高 有時加藥組高
但相同sample做duplicate或triplicate是沒問題的)
甚至連相同的cDNA sample放了一周後也無法做出一樣的結果
後來另一個老師說這可能還是手的問題
建議我用hydrolysis probe 可以同一個sample裡染不同的cDNA
照了建議重新設計買了primer和probe
還有universal probelibrary GADPH的primer和probe
結果是可以在同smaple同時做出兩種基因的表現
但Cq值的relative 定量計算結果還是亂七八糟的
怎麼做都做不出microarry的結果
上網查了一下好像也沒有定論說microarry和qPCR的結果一定會一樣或不同
因為我不是生科本行出生的 不知道各為大大怎麼看?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 133.87.71.254
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※ 編輯: hachibuya (133.87.71.254), 11/25/2015 16:38:03
※ 編輯: hachibuya (133.87.71.254), 11/25/2015 16:38:45
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