[方法] 比較各種cell line beta-actin表現量

看板Biotech (生命科學)作者 (咩)時間9年前 (2016/03/31 20:04), 9年前編輯推噓2(2011)
留言13則, 5人參與, 最新討論串1/1
我的實驗是用western blot比較各種cancer type某基因表現量,並以beta-actin作為int ernal control. 目前做兩次(分別測濃度),壓片結果每種cell line間的beta-actin都有高有低,不是 像單一cell line處理的那麼一致。 請問loading 相同濃度的total lysate,不同細胞應該beta-actin量也可能不同嗎? 因為老師挑我actin沒配好,但心中覺得哪裡怪怪的...... 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 42.73.118.113 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1459425849.A.B89.html ※ 編輯: spirithorse (42.73.118.113), 03/31/2016 20:07:18

03/31 20:12, , 1F
你們老師肯定沒做過,不一定是你定量問題
03/31 20:12, 1F

03/31 20:15, , 2F
我以15株(其中10株breast)經RIPA以BCA定量後跑膠的結果,
03/31 20:15, 2F

03/31 20:18, , 3F
tubuline變化最大,ACTB在breast還好,但不同tissue也會不同
03/31 20:18, 3F

03/31 20:20, , 4F
GADPH在不同tissue則是比ACTB好,你最好能試過選其一
03/31 20:20, 4F

03/31 20:29, , 5F
paper做法,有些只寫濃度不放control,有些是寫以conrol定量
03/31 20:29, 5F
謝謝(拭淚)當下我想到的是細胞大小有差異,所以actin應該也會不同 ※ 編輯: spirithorse (42.73.118.113), 03/31/2016 20:53:23

03/31 22:40, , 6F
推樓上 不過通常多組細胞要量化用數字比
03/31 22:40, 6F

03/31 22:40, , 7F
western圖分開放 然後control要慎選
03/31 22:40, 7F

04/01 19:03, , 8F
推樓樓上,然後記得要把圖量化來做比較
04/01 19:03, 8F

04/01 19:06, , 9F
Total protein as loading control may solve your prob
04/01 19:06, 9F

04/01 19:06, , 10F
lem
04/01 19:06, 10F

04/01 19:55, , 11F
順問一下 染完抗體後 以 comassive blue染 pvdf作為 t
04/01 19:55, 11F

04/01 19:56, , 12F
otal protein ctrl可行嗎?
04/01 19:56, 12F

04/01 20:43, , 13F
除了植物等其他模式物種,人類癌細胞沒看過有paper
04/01 20:43, 13F
文章代碼(AID): #1M_H8vk9 (Biotech)
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