[求救] 關於細胞冷凍

看板Biotech (生命科學)作者 (貞夫)時間9年前 (2016/04/18 11:45), 編輯推噓2(2025)
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想請問如果解凍養一代就再冷凍 會不會影響細胞內部的一些機制 導致降低重複實驗的再現性 還是只是會影響存活率? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.112.154 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1460951133.A.C7D.html

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解凍一代再冷凍的目的是?
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建議不要,細胞解凍後其實蠻脆弱的,至少養個三代左
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右,確定細胞健康後再凍
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04/18 13:54, , 4F
因為老闆要求實驗用的細胞都是在同一代 我那時候凍大概
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是算在我要做實驗那代的前五代 我怕凍的那些細胞不太夠
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後續的實驗 想說解凍一到二代再冷凍 之後解凍剛好養三代
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再做實驗 所以想問說如果這樣凍的話是影響存活率還是內
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部機轉 如果只是影響存活率的話 對我沒有差別這樣
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細胞的機制這麼多,所謂的影響,也不一定會跟你的興趣相關
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而且細胞是活是的存活狀況,不也是細胞內的機制在調控嗎?
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如果你的細胞不是特別怪,你可以考慮以有限的凍管先做幾次
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同時用後面一兩代也留著試試,確認代數是否很關鍵
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以不同代的凍管養到同一代的細胞實驗,跟同一批凍管前後代
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的結果還要差,如果老闆很在意data的,就不會拘泥要同一代了
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感謝你的建議
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如果對照因素和你老闆做的那一代没什麼差異,基本上可以不用
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擔心代數問題。如果代數結果有差異,那表示你們要控制代數問
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題,而且你們的實驗可能要重新設計。
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確認代數是否為關鍵+1 不然你就要考慮做cell bank
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設定留存的細胞代數以及工作用的細胞代數, 才知道
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用量, 也才好抓條件, 不過這個在細胞株應該沒甚麼
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必要才是....差個一兩代不應該有差
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差一兩代這個因子 跟細胞當下狀態對實驗結果的影響比起
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來 通常是小巫見大巫 不過或許你老闆曾經有這方面的慘痛
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經驗也說不定 如果細胞是具與differentiation potential
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也可能passage之間差異頗大 依舊要小心
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文章代碼(AID): #1N55XTnz (Biotech)
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