[求救] 用flow測細胞存活率

看板Biotech (生命科學)作者 (傻達歐)時間9年前 (2016/05/17 18:06), 9年前編輯推噓4(4013)
留言17則, 5人參與, 最新討論串1/1
最近才開始接觸flow 想起問一些問題 1. http://i.imgur.com/w1mYUpV.jpg
這是只有細胞,不經任何處理 像這樣圈gate 只有圈到5% 算正常的嗎? 或是我範圍應該要圈大一點? 總覺得顯微鏡下觀察的細胞數很多 結果跑flow 50000顆中只有2500顆是細胞這比例怪怪的 2.http://i.imgur.com/VTHTy7u.jpg
這是上圖gate中的細胞,FITC跟PI的結果 完全無處理,細胞存活率這麼低是正常的嗎? 因為是還有要測其他膜蛋白 怕trypsin處理會有影響 所以細胞是用刮棒刮下來的 刮的過程有在冰上 如果不正常,想請問有甚麼可以改善的方法嗎? 細胞是用LL2 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.112.154 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1463479564.A.D69.html ※ 編輯: satan317 (140.109.112.154), 05/17/2016 18:06:37

05/17 18:29, , 1F
試試看accutase打 看起來存活率只有50% 有點太低了
05/17 18:29, 1F

05/17 18:30, , 2F
你上普通PBS或是沒有細胞的medium也會有左下角那群嗎?
05/17 18:30, 2F

05/17 20:31, , 3F
可用Versene solution dissociation cells
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05/17 20:31, , 4F
dissociate
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05/18 01:12, , 5F
沒試過純pbs跟medium
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05/18 01:13, , 6F
不過我在想應該跟我medium和PBS也收集起來一起離有關
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05/18 09:51, , 7F
只有50%是細胞很有可能是因為 A. debris B. false signal
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triger by noise。假設你permilize的步驟問題不大,那應
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該就是在B的問題。因為你threshold數值設為1,因此一個細胞
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有可能會顯示兩個訊號,而比較強的訊號就是你的main popula
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tion, 而比較弱的訊號就是出現在像是拖尾的地方。
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05/18 09:53, , 12F
建議可以拉高threshold的值到50試試看,main population應
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該會變的更圓一些。
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05/18 12:12, , 14F
你fsc-ssc圖的scale bar是不是要用linear的?用log的會不會
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把細胞壓縮了?
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threshold是指電壓嗎?
05/18 13:20, 16F

05/18 13:23, , 17F
剛有試著用linear 差別不大
05/18 13:23, 17F
文章代碼(AID): #1NEkqCrf (Biotech)
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