[討論] SDS-PAGE sample煮過後跑不下來

看板Biotech (生命科學)作者 (鼻子好像灌太多了)時間9年前 (2016/06/10 10:58), 編輯推噓1(107)
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http://i.imgur.com/9BgVoQW.jpg
如圖所示, PC是小鼠組織萃取的positive control, 1是沒transfect plasmid的細胞,2、3是有transfect plasmid的細胞,在煮過之後只有細胞組的目標蛋白會卡在上面跑不下來。 雖然不煮之後就成功跑下來了,但還是對這個狀況很好奇,請問大家有遇過類似狀況嗎? 煮的條件是104度乾浴槽煮10分鐘,用的是DTT。 ----- Sent from JPTT on my Sony D6503. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.209 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1465527483.A.D33.html

06/10 12:21, , 1F
Transmemberane protein? 有的好像要 65C 才跑的比較好
06/10 12:21, 1F

06/10 13:25, , 2F
是transmembrane protein沒錯,但為什麼只有細胞的會卡
06/10 13:25, 2F

06/10 13:25, , 3F
住………
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06/10 14:59, , 4F
煮的溫度太高完全 denature 後降溫造成蛋白質疏水部 (
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06/10 15:00, , 5F
transmembrane)的 aggrigation,因此過量表現時更容易
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發生這個現象。 現在很多 protocol 都寫 Do not boil!
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06/10 15:01, , 7F
建議的溫度是 70 度 15 分鐘。
06/10 15:01, 7F

07/08 00:18, , 8F
感覺會不會是genomic DNA黏住, sonicate sample看看
07/08 00:18, 8F
文章代碼(AID): #1NMYoxqp (Biotech)
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