[求救] 抽RNA 加75%EtOH離心後無pellet

看板Biotech (生命科學)作者 (毒瘤)時間9年前 (2016/10/07 19:04), 9年前編輯推噓4(4018)
留言22則, 8人參與, 最新討論串1/1
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等)之分讓, 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作 簽署材料分讓協議(MTA),否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 小弟用實驗室的protocol抽RNA 基本上是phenol-chforoform法 目前做到最後面幾步 等待清洗用的酒精揮發後將pellet用純水回溶 → 測定RNA濃度 由於 260/230大於2.5認為是酒精還沒乾就回溶 於是再加入75%EtOH 並且離心 打算重來一次清洗的步驟 到這邊還算正常 之前的RNA pellet存在且大小OK 結果離心完發現管子裏頭沒有pellet 大崩潰!!! 求助!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.95.203 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1475838264.A.22B.html

10/07 20:20, , 1F
要補鹽類啦 不然無法沉澱出來
10/07 20:20, 1F

10/07 20:28, , 2F
不是很懂要補鹽類的意思
10/07 20:28, 2F

10/07 21:20, , 3F
我們沒看到pellet都繼續做,溶下去就有了XD
10/07 21:20, 3F

10/07 21:22, , 4F
一樓應該是指要加十分之一體積的3M NaOAC?
10/07 21:22, 4F

10/07 22:20, , 5F
就是樓上說的!! 可以另外去估狗LiCl
10/07 22:20, 5F

10/07 22:41, , 6F
我們都加 glycogen 。比較不會影響後續的實驗
10/07 22:41, 6F
實驗室用的protocol裏頭有一步驟即是加上1/10體積的NaOAc 不過教導實驗的助理沒有說明過原理 感謝各位的信息提供!! ※ 編輯: tumourjoke (140.114.95.203), 10/07/2016 23:23:37

10/07 23:41, , 7F
借串請問一下 TRIZOL抽的protocol中 倒掉isopropanol後
10/07 23:41, 7F

10/07 23:42, , 8F
就直接加75%EtOH 不用補鹽類的原因是?
10/07 23:42, 8F

10/08 00:03, , 9F
其實步驟中有提到 ,細胞或是組織少的時候 。可以加NaO
10/08 00:03, 9F

10/08 00:03, , 10F
AC,幫助沈澱
10/08 00:03, 10F

10/08 19:14, , 11F
etoh>70%+高鹽 鹽會把水搶走 讓核酸沈澱 glycogen只是
10/08 19:14, 11F

10/08 19:15, , 12F
稀釋體積比較好pipet
10/08 19:15, 12F

10/08 19:16, , 13F
isopropanol後的沈澱本身就很多鹽 70%etoh反而是要把
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10/08 19:16, , 14F
太多的鹽洗掉
10/08 19:16, 14F

10/10 13:02, , 15F
260/230>2.5是酒精沒乾就回溶? 哪裡查到的阿?
10/10 13:02, 15F

10/10 13:03, , 16F
核酸溶解度:低鹽>高鹽;70%EtOH>100%EtOH>H2O 把握這原則
10/10 13:03, 16F

10/10 13:03, , 17F
即可 至於glycogen和linear acrylamide則是替小片段核酸
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10/10 13:04, , 18F
和少量核酸增加沉澱機會而已 例如tRNA或oligo等等 所以
10/10 13:04, 18F

10/10 13:05, , 19F
坦若本來就沉澱得出來 加此兩項 意義不大
10/10 13:05, 19F

10/10 13:12, , 20F
另外上面提到LiCl 有人說不適合小片段RNA 並可能抑制RT
10/10 13:12, 20F

10/10 13:13, , 21F
所以請斟酌使用
10/10 13:13, 21F

10/17 20:46, , 22F
RNA和DNA所須使用的phenol pH值也不同,要注意。
10/17 20:46, 22F
文章代碼(AID): #1Nzu4u8h (Biotech)
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