[求救] 有人做過lysosome fraction isolation嗎

看板Biotech (生命科學)作者 (黃金騎士 牙狼)時間8年前 (2017/03/20 22:46), 編輯推噓1(1010)
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我使用ThermoFisher的kit Lysosome isolation kit from tissue and cultured cells https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/89839 試著分離MDA-MB-231乳癌細胞的lysosome 結果分離出來的東西做WB和total cell lysate有八七成像 表示分離完全失敗 我遇到的一個問題是說明書上的範例使用A431 cell lysate完是乳白色液體 超離心後會有很明顯的分層 http://i.imgur.com/NwQwo8H.jpg
但是我的cell lysate是透明的 離完心全部都是透明的 我只好假裝有分層取最上層2ml的液體來分析 結果是失敗的 不知道有沒有人有經驗能幫幫我的 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 133.87.71.65 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1490021170.A.232.html

03/20 22:55, , 1F
沒用過隨便問XD 你的gradient怎麼疊的?
03/20 22:55, 1F

03/20 22:57, , 2F
就照說明書上的30% 27% 23% 20% 17%這樣疊, 但上面也
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03/20 22:59, , 3F
註明濃度可能會依細胞不同有所不同 我會再查看看
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03/20 23:00, , 4F
cell lysate是15%疊在最上面
03/20 23:00, 4F

03/21 00:48, , 5F
1.細胞怎麼破的 2.lysate乳白色應該是胞內lipidor高
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03/21 00:48, , 6F
濃度蛋白 細胞下多少呢?
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03/21 00:53, , 7F
如果不確定分離效果 ,你可以把 gradient分 fraction
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03/21 00:53, , 8F
,每個都去跑 WB看看結果
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03/21 02:13, , 9F
鍵盤抓蟲看看 如果最上面的2ml跟total lysate差不多可
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03/21 02:14, , 10F
能是gradient被破壞掉了 你上ultra之前的gradient還
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03/21 02:14, , 11F
完整嗎?
03/21 02:14, 11F
文章代碼(AID): #1Op-io8o (Biotech)
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