PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] Western 問題

看板Biotech (生命科學)作者 (小邱)時間7年前 (2017/04/07 23:42), 編輯推噓11(11推 0噓 22→)
留言33則, 18人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
大家好 最近試跑western出了一些問題 如下 beta catenin 92kDa https://imgur.com/a/u79tJ GAPDH 37kDa https://imgur.com/a/Cfqd8 LC3 16kDa https://imgur.com/a/Ryiqp 同一片膠 beta catenin 和 LC3 呈鋸齒狀 GAPDH 雖然沒有鋸齒 不過卻連在一起 不知道哪裡出了問題? 條件: 12% gel 0.75mm sample loading量10~15ul running 160V 10min 接著90V跑到底 transfer to PVDF 溼式 240mA 120min 麻煩大家了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 122.116.165.36 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1491579742.A.B6A.html
→
04/08 00:31, , 1F
第一次看到 stacking 跑的電壓比 separating 還高的！
04/08 00:31, 1F
→
04/08 00:33, , 2F
你的 gel 應該是自己做的有分上下層的那種吧？
04/08 00:33, 2F
→
04/08 01:05, , 3F
電流不穩?另外考慮蛋白質放少一點嗎?(你放多少 質量 的蛋白
04/08 01:05, 3F
→
04/08 01:05, , 4F
質，拜託不要跟我講體積)
04/08 01:05, 4F
→
04/08 05:50, , 5F
我也覺得是stacking跑太快而已
04/08 05:50, 5F
→
04/08 12:02, , 6F
先慢後快 一開始60V而非160V才對
04/08 12:02, 6F
→
04/08 18:08, , 7F
gel是自己做的沒錯 蛋白量35ug 160V是參照前人的
04/08 18:08, 7F
→
04/08 18:09, , 8F
protocol 下次跑看看低電壓
04/08 18:09, 8F
→
04/08 18:12, , 9F
感謝大家解答
04/08 18:12, 9F
→
04/08 18:59, , 10F
知道 Western gel 分兩層的原理的話，看到這電壓一定會
04/08 18:59, 10F
→
04/08 18:59, , 11F
覺得有鬼。台灣科學研究的基礎教育已死....
04/08 18:59, 11F
推
04/08 19:14, , 12F
要不要先瞭解原理，不是前人說的就是對的!
04/08 19:14, 12F
推
04/08 19:52, , 13F
大推160V XDDDDDDDDDDDDDD
04/08 19:52, 13F
推
04/08 23:13, , 14F
我有開160結果沒事耶 (掩面
04/08 23:13, 14F
推
04/08 23:17, , 15F
哈哈,我也用過400V跑15min,驚覺這兩片膠比另外兩片膠快
04/08 23:17, 15F
→
04/08 23:18, , 16F
趕快把速度調慢,不過那次效果還可接受(但後來還是不敢用
04/08 23:18, 16F
推
04/09 13:16, , 17F
我下次也要試試看160V
04/09 13:16, 17F
推
04/09 15:44, , 18F
普通膠跟普通Buffer，開超過200過，會很燙且冒煙
04/09 15:44, 18F
→
04/09 15:45, , 19F
要高電壓要用特殊膠或特殊Buffer較沒問題
04/09 15:45, 19F
推
04/09 22:08, , 20F
一般是先慢後快+1
04/09 22:08, 20F
推
04/09 22:10, , 21F
transfer部分再小心一下，別轉一般位移？
04/09 22:10, 21F
→
04/10 01:25, , 22F
電壓太高造成溫度過高?
04/10 01:25, 22F
→
04/11 13:14, , 23F
很危險
04/11 13:14, 23F
推
04/16 01:33, , 24F
上膠電壓太快 一般都先慢在快 transfer buffer有沒有加me
04/16 01:33, 24F
→
04/16 01:33, , 25F
thanol 我忘記加過 跑出來好像也這樣
04/16 01:33, 25F
推
04/18 16:04, , 26F
我之前就是依照前人的方法也跑出波浪型的wb 然後被老板
04/18 16:04, 26F
→
04/18 16:04, , 27F
罵到臭頭 後來才發現前人的TEMED整整是別人的五倍
04/18 16:04, 27F
→
04/18 16:05, , 28F
改回原本倍數之後 就沒跑過波浪膠了
04/18 16:05, 28F
→
04/22 23:49, , 29F
高電壓的特殊配方式什麼啊？
04/22 23:49, 29F
→
04/23 01:57, , 30F
廠商賣的 Bis-Tris-HCl gel 官方給 200V 50min，
04/23 01:57, 30F
→
04/23 01:57, , 31F
雖然也是可以買 Bis-tris 回來自己做，但 Bis-Tris 本
04/23 01:57, 31F
→
04/23 01:58, , 32F
身就很貴了......有錢人才能花錢換時間啊
04/23 01:58, 32F
推
04/28 21:05, , 33F
上膠我都用70跑。第一次看到160衝到底
04/28 21:05, 33F
‣ 更多 reborn54391 的文章
文章代碼(AID): #1OvxDUjg (Biotech)
討論串 (同標題文章)
完整討論串 (本文為第 1 之 2 篇)：
排序： 最舊先 | 最新先 | 留言數
在新視窗開啟完整討論串 (共2篇)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 reborn54391 的文章
文章代碼(AID): #1OvxDUjg (Biotech)