[求救] transformation 瘋狂爆盤TT
我想請問各位大大,小弟先將要的片段PCR P出來,在gel extraction 將要用的片段弄乾
淨後,ligation 到Yeast T4DNA vector放室溫20min~30min後放到4度overnight,隔天要
做的時候,再將ligation DNA回到室溫20min~30min後在將ligation DNA加入1/3未融的DH
5a ,回插冰上30min然後放到42度heat shock 1min瞬間回插冰上5min,加入1mlLB broth,
移到37度incubator搖30分鐘,取100ul未離心先塗盤,在用3000轉5min慢速離心,將上清
液去除,留100ul 將菌團打散100ul塗盤,放37度incubator16hr,隔天取樣,plate中心皆
有藍白菌落大概20-30顆,但plate周圍都是滿滿的爆盤,做了好幾次都這樣,菌液也都有
塗乾,不知道為什麼會這樣請大家幫幫忙,還挑不到正確的菌落中
http://i.imgur.com/TOwUZit.jpg


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