PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] 改變凝膠速度及APS、TEMED用量問題

看板Biotech (生命科學)作者 (槿花未開)時間7年前 (2017/05/11 16:40), 7年前編輯推噓15(15推 0噓 44→)
留言59則, 12人參與, 最新討論串1/1
又來求救！(跪 讀碩班真的比想像中的困難很多QQ 想請教凝膠相關問題 因為實驗需求所以希望拉低室溫中凝膠速度，以加熱的方式進行局部凝膠 簡單來說就是希望室溫中凝膠速度很慢，但是如果拿去加熱的話又可以一下子就凝膠 現在的問題是，如果要調整凝膠速度，應該改變APS的量還是TEMED的量? 還是應該兩個一起變動? 目前都是只有改變APS的量而已 另外，由於我手腳慢T^T所以在想說能不能把單體跟交聯劑混合的溶液先滴到我要成形的 模具中，再於模具中加入APS及TEMED? 這樣等於模具中的APS、TEMED沒有經過攪拌，是否會因為濃度不均而無法凝膠? 3 4 5 6 ┌────────────────┐ NIPAAm(單體)｜1.200g 0.600g 0.600g 0.300g ｜ ｜ ｜ NMBA(交聯劑)｜0.050g 0.025g 0.025g 0.013g ｜ ｜ ｜ 10%wt APS ｜200uL 50uL 30uL 15uL ｜ ｜ ｜ TEMED ｜40uL 20uL 20uL 10uL ｜ ｜ ｜ DI water ｜20ml 10ml 10ml 5ml ｜ └────────────────┘ 凝膠時間 <5min 5min 30min 6min 上面是目前做過的測試，一直都是改變APS，但突然想到TEMED才是促進劑 是不是其實我應該改變的是TEMED呢 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.115.65.158 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1494492042.A.CE7.html
推
, , 1F
該改變的是房間冷氣的強度
咦，冷氣沒有很冷，大概26度 一般室溫而已 05/11 17:38 ※ 編輯: lyonalaya (114.137.168.175), 05/11/2017 17:47:58
→
05/11 18:33, , 2F
TEMED
05/11 18:33, 2F
所以我APS的量應該回歸第三次的量，然後調整TEMED比較好嗎？
→
05/11 18:53, , 3F
temed是initiator 可以最後再pipet到已經倒好的膠裡
05/11 18:53, 3F
→
05/11 18:53, , 4F
面 但可以想像這樣不會太快
05/11 18:53, 4F
→
05/11 18:54, , 5F
理論上照光會加速吧沒記錯的話
05/11 18:54, 5F
咦，initiator翻譯不是應該是起始劑嗎OAO還是我英文爛... 那APS要在倒之前先加好並攪拌均勻，倒好膠後再個別滴TEMED？ ※ 編輯: lyonalaya (114.137.168.175), 05/11/2017 19:08:38
→
05/11 19:45, , 6F
我們家壞掉的APS跟你換 讓你40min都不凝喔~ (大誤)
05/11 19:45, 6F
別這樣QAQ我只是希望他慢一點凝而已，不能完全不凝 話說理論上加熱是可以加速凝膠的吧？ ※ 編輯: lyonalaya (114.137.168.175), 05/11/2017 19:48:52
→
05/11 19:54, , 7F
I大+1 TEMED最後加
05/11 19:54, 7F
→
05/11 21:33, , 8F
只加APS其實就會凝,只是非常久(天),但只加TEMED完全不會凝
05/11 21:33, 8F
→
05/11 21:34, , 9F
APS維持總體積百分之一就好,改TEMED到萬分之一以下試試？
05/11 21:34, 9F
看完B大的回答，突然覺得我前幾組實驗好像都走錯方向了〒▽〒 下次實驗照B大建議的試試看 ※ 編輯: lyonalaya (59.127.61.190), 05/12/2017 00:28:02
推
05/12 08:58, , 10F
你的TEMED加這麼多難怪凝很快XD
05/12 08:58, 10F
→
05/13 08:30, , 11F
這幾個東西的作用不是在做膠的第一天就該搞懂了嗎?
05/13 08:30, 11F
→
05/13 08:30, , 12F
現在念碩班已經這麼簡單了喔?
05/13 08:30, 12F
對不起，自從高中後就沒碰化學了〒▽〒 機械系沒修化學QAQ不太曉得這方面相關知識要看哪本書比較好Orz
→
05/13 18:56, , 13F
樓上 原po是機械的啦~ 生科不會的話生化老師都要哭了吧 (
05/13 18:56, 13F
→
05/13 18:56, , 14F
結果好多老師擦淚......)
05/13 18:56, 14F
感謝T大說明QAQ 所以像是聚合反應凝膠這類相關知識應該借什麼書來看比較好〒▽〒 ※ 編輯: lyonalaya (59.127.61.190), 05/13/2017 20:36:25
推
05/14 01:54, , 15F
一般的生技實驗課本就會有了 或直接餵狗有詳細教學
05/14 01:54, 15F
→
05/15 12:36, , 16F
你google 丙烯醯胺 temed aps 就有中文資料了
05/15 12:36, 16F
推
05/16 23:29, , 17F
原po人也太好，某樓那種留言還願意道歉
05/16 23:29, 17F
→
05/17 00:55, , 18F
樓上的發言令我萬分訝異！ 碩班作實驗前搞懂基本原理
05/17 00:55, 18F
→
05/17 00:57, , 19F
這種第一天就開始要求的東西竟以成奢望！
05/17 00:57, 19F
→
05/17 02:23, , 20F
我覺得對機械系用生科應該會理解的認知去要求是蠻不合理的
05/17 02:23, 20F
→
05/17 02:25, , 21F
換個角度想,碩士做PAGE時不是用NIPAAm,都是想過原理的嗎？
05/17 02:25, 21F
→
05/17 02:28, , 22F
在順便問一個我也不懂的,為什麼這裡NIPAAm與NMBA用24:1
05/17 02:28, 22F
→
05/17 02:29, , 23F
可是實驗是只會用19/29/37.5:1,有知道不用24:1的學理嗎?
05/17 02:29, 23F
推
05/17 18:13, , 24F
未了解原理就作實驗 是現在學生的通病...沒辦法
05/17 18:13, 24F
推
05/17 18:21, , 25F
b大的問題應該跟cross linker含量有關, 至於沿用19,37.5
05/17 18:21, 25F
→
05/17 18:21, , 26F
我個人推測是因為這幾種比例已經有很多資料 要除錯比較
05/17 18:21, 26F
→
05/17 18:22, , 27F
簡單 24:1應該也可以用 但是跑起來的效果無法保證
05/17 18:22, 27F
推
05/17 18:28, , 28F
碩班最重要的不就是要訓練出這些觀念？ 願意學會發問才
05/17 18:28, 28F
→
05/17 18:29, , 29F
才是重點吧？
05/17 18:29, 29F
→
05/17 18:30, , 30F
現在他不懂, 你講了他懂了學會了,那他還是爛學生嗎？
05/17 18:30, 30F
推
05/17 18:54, , 31F
能問當然是好事 但是跨領域的確得先學好要作事物的基礎
05/17 18:54, 31F
→
05/17 20:10, , 32F
連j大已經說明24:1以及NIPAAm並非慣用的條件了,也還認同上
05/17 20:10, 32F
→
05/17 20:10, , 33F
面認為原po的實驗可以輕易google解決的觀點嗎？
05/17 20:10, 33F
推
05/17 23:03, , 34F
應該說 大家直覺 會來這個版的應該都三類的...
05/17 23:03, 34F
推
05/18 00:23, , 35F
原po為什麼用1:24啊?
05/18 00:23, 35F
咦，大家不要吵架啊 我的比例是從其他人的論文裡面找到的 因為老師一開始是希望我先重現論文 所以之後我才沒有特別去改變單體跟交聯劑比例 沒有先搞清楚藥品作用確實是我的錯 因為我主要是想把它拿來應用在其他方面 所以覺得我只要做得出來就好了 就像是會用公式解題就好了原理證明並不用一定要懂 不過現在看起來只會用好像還是不夠的 會去再多找相關資料看 這個應該讀化學還是生技相關課本啊〒▽〒 ※ 編輯: lyonalaya (36.228.53.59), 05/18/2017 00:58:34
→
05/18 01:09, , 36F
當然是化學,生技看到這些只會想到"跑膠"用途
05/18 01:09, 36F
可是化學有分有機化學無機化學還有高分子化學Orz 我很久之前曾經找過一輪，可是完全看不懂啊(跪 難道我要整本從頭啃一輪QQ
推
05/18 02:45, , 37F
我比較好奇實驗目的是什麼? 那些比例影響的是跑膠
05/18 02:45, 37F
→
05/18 02:46, , 38F
起來的樣子, 為何要室溫慢而要加熱才做咧?
05/18 02:46, 38F
我希望應用在bimorph雙層結構上面，想做熱致動器 然後希望加熱凝膠是因為希望可以透過使用micro heater局部加熱的方式定義圖形 所以希望室溫幾乎不凝膠，但是加熱又可以很迅速的凝膠 這樣才可以在有加熱跟沒加熱的地方出現區別，而定義出我想要的圖形 話雖如此，但是總覺得很難啊〒▽〒 ※ 編輯: lyonalaya (36.228.54.117), 05/18/2017 09:19:00
→
05/18 16:13, , 39F
真的可以用acrylamide做嗎XD 你aps跟temed加下去整片
05/18 16:13, 39F
→
05/18 16:13, , 40F
膠就一定會凝啊
05/18 16:13, 40F
所以希望室溫跟加熱可以有區別啊 這樣加熱部分固化，沒加熱部分沒固化 結果今天實驗還是失敗了 明明TEMED已經減少到1uL，還是三分鐘就凝膠 這次照B大說的APS百分之一，TEMED萬分之二（pipet最小就1uL) 而且很奇怪的，TEMED滴下去那區就變真空一樣T^T ※ 編輯: lyonalaya (140.115.65.158), 05/18/2017 16:44:11 http://i.imgur.com/bgt6uyQ.jpg
附個失敗照給大家笑笑〒▽〒 完了我覺得我畢業遙遙無期 順便有一點不太懂，為什麼做出來的膠有透明跟白色呢 是跟凝膠速度有關係嗎 ※ 編輯: lyonalaya (140.115.65.158), 05/18/2017 16:50:06
→
05/18 17:03, , 41F
我說的是10% APS用百分之一，也就是20ml膠體含20mg APS
05/18 17:03, 41F
→
05/18 17:04, , 42F
不過如果你真的用20mg APS還3分鐘凝,我也不知道怎麼改了
05/18 17:04, 42F
對的，不過我沒做這麼多，只做5ml 5ml膠體含5mgAPS 說凝好像也不對，因為是燒杯的混合液凝，試片上的卻沒有凝 我覺得我乾脆TEMED另外加算了 等我把燒杯裡的混合液滴到試片上再個別加TEMED好了Orz ※ 編輯: lyonalaya (140.115.65.158), 05/18/2017 17:18:14
推
05/18 18:55, , 43F
你的APS是不是iAPS? 潮到出水的那種 orz
05/18 18:55, 43F
咦，可是我的問題是膠凝太快 如果APS受潮不是會無法凝膠嗎 還是膠的顏色跟APS有關係 ※ 編輯: lyonalaya (42.72.197.44), 05/18/2017 19:10:04
推
05/18 19:41, , 44F
是該先搞懂原理，但是話可以好好說，人家是上來"求救"
05/18 19:41, 44F
→
05/18 19:43, , 45F
的，自己有這方面知識的話，可以提供他方向請他再去查
05/18 19:43, 45F
→
05/18 19:43, , 46F
即可
05/18 19:43, 46F
推
05/18 23:34, , 47F
我是建議你不要單吊acrylamide 另外試幾個polymer acr
05/18 23:34, 47F
→
05/18 23:34, , 48F
ylamide我是不太樂觀
05/18 23:34, 48F
NIPAAm跟acrylamide不一樣吧OAO 我記得全名是N-isopropyacrylamide，是一樣的嗎？ 老師希望先測完這個不行再換材料QAQ ※ 編輯: lyonalaya (36.228.53.59), 05/18/2017 23:44:02
→
05/18 23:38, , 49F
局部加熱不是會有擴散的問題嗎?
05/18 23:38, 49F
是指熱毛細力的擴散嗎？ 這個要等我先把完整薄膜做出來再說T^T ※ 編輯: lyonalaya (140.115.65.158), 05/19/2017 12:40:04
推
05/20 00:10, , 50F
太直覺沒發現原 po的膠另有他用 orz 抱歉
05/20 00:10, 50F
咦，不用道歉啊，大家提供的建議都很有用啊 如果我有幸順利畢業一定是有大家的幫助的原因 ※ 編輯: lyonalaya (36.228.60.25), 05/20/2017 11:47:02
→
05/22 12:57, , 51F
有個想法 你的試片膠都直接大面積接觸空氣? 可是我們作WB
05/22 12:57, 51F
→
05/22 12:57, , 52F
膠時是注入兩片薄玻璃的窄縫隙裡 其實接觸空氣面很小(甚
05/22 12:57, 52F
→
05/22 12:57, , 53F
至可說無) 不知道接觸空氣面積大會不會是你的膠凝很快或
05/22 12:57, 53F
→
05/22 12:57, , 54F
有真空洞(?)的原因 加油~
05/22 12:57, 54F
的確是大面積接觸空氣沒錯，可是這部分條件沒辦法改變〒▽〒 頂多就是我滴到試片上以後，用玻璃蓋住上方QQ 因為實驗需求問題，所以只能這樣 不過接觸面積這部分，我之前好像依稀有看到某個網站提到是因為TEMED在空氣中很容易 氧化(?)失去作用? 詳細的內容記不太清楚，我再去找找資料，我之後實驗改成不加TEMED了 有真空洞問題應該跟接觸面積沒關係XD 因為很明顯空洞是我滴下TEMED後產生的 發現還有人來回應，那我也來更新實驗狀況>w< 最近一次實驗，按照上面大大的建議，把APS量改回10%wt膠體量百分之一 所以2ml膠體加10%APS 20uL，然後不加促進劑 有解決燒杯裡的混合液太快凝膠問題，接下來是加熱加速試片上的混合液凝膠 不過通常都是加到試片上的混合液乾掉Orz 雖然周邊有凝固，可是卻不是完整覆蓋試片的薄膜，目標是形成完整薄膜 所以正在考慮如果完全不加促進劑，只加大APS的量，然後利用加熱提供能量加速凝膠 不知道可不可行 APS是提供自由基開始聚合反應的，如果APS濃度增加，混合液裡面有夠多自由基 再藉由加熱加速聚合反應，也許可以不需要加促進劑就凝膠 也可以達成我的目標，室溫下不凝膠但加熱卻又可以快速凝膠 當然也有可能是我的美好妄想而已〒▽〒 ※ 編輯: lyonalaya (140.115.65.158), 05/22/2017 13:46:15 ※ 編輯: lyonalaya (140.115.65.158), 05/22/2017 13:50:58
→
05/23 04:15, , 55F
也許你該試試其他自由基提供者 加熱未必能有效的促使APS
05/23 04:15, 55F
→
05/23 04:16, , 56F
釋放自由基 我是覺得既然你的研究是希望能做出對熱有反應
05/23 04:16, 56F
→
05/23 04:17, , 57F
的凝膠 而聚合反應你又掌握了 就是 單體+自由基=聚合體
05/23 04:17, 57F
→
05/23 04:18, , 58F
那單體不動的情況下 則應去尋找是否有對熱靈敏的自由基源
05/23 04:18, 58F
→
05/23 04:19, , 59F
從你的實驗結果看來 APS對熱並不靈敏
05/23 04:19, 59F
好的，感謝B大提供方向>W< 會先試著提高APS濃度同時找找看有沒有其他熱靈敏的自由基提供者 感謝大家幫忙提供意見！ ※ 編輯: lyonalaya (140.115.65.158), 05/23/2017 15:37:03
‣ 更多 lyonalaya 的文章
文章代碼(AID): #1P52EApd (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 lyonalaya 的文章
文章代碼(AID): #1P52EApd (Biotech)