[求救] IHC品質不穩定

看板Biotech (生命科學)作者raylie9093 (Ray)時間7年前 (2017/10/26 21:37)推噓3(3推 0噓 4→)

留言7則, 3人參與討論串1/1

大家好，目前遇到的ＩＨＣ狀況品質容易不穩定染色出來可能同一批有些結果很漂亮很正常，但也會有很差的（操作的都是臨床檢體）同個control出來的深淺區塊不ㄧ致，有片子的很濃、有些很淡或者同sample的結果深淺有落差、染上的區塊會有點不太一樣，是有猜可能切片的切面可能也會影響到這件事大致上的步驟如下 1.Deparaffin(in Xylene) 3次 2min 2.Hydration 100%Alc-95%Alc-75%Alc-H2O-H2O 各1次 2min 3.Antigen retrieval in autoclave 10-15min 然後用Kit，大致上是： 1.peroxidase 5min 2.blocking 5min 3.primary antibody 室溫1hr 4.post-antibody 10min 5.polymer 10min 6.DAB 5min 7.Hematoxylin 5min 不知道是不是哪個環節該調整或者操作時該注意的，可以做出穩定的品質？如果Deparaffin 和 Hydration的時間加長（變2min30sec是否足夠？) 可以改善嗎？但是會不會因此容易掉片（用coating片操作前也烤過）還是有其他的可以給我一點建議？謝謝！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.217.235.218 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1509025072.A.DF9.html

推

johanjohan

10/26 22:10, 7年前 , 1^F

10/26 22:10, 1^F

→

johanjohan

10/26 22:10, 7年前 , 2^F

10/26 22:10, 2^F

1.formalin的固定還是烤片？ 2.有用防水筆圈，也有注意乾掉的問題，但是怎樣才算真的乾掉？因為我在圈檢體的時候，大致上就是擦乾到想圈的範圍，然後用防水筆圈大概看檢體上是有薄薄的水分，還是動作要再快一點？因為我又怕範圍擦不乾防水筆暈開其他的實驗步驟就盡量讓片子保持水份的狀態 ※ 編輯: raylie9093 (180.217.235.218), 10/26/2017 22:26:48