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[求救] total RNA DNase treatment

看板Biotech (生命科學)作者 (旗魚)時間7年前 (2017/10/27 13:16), 7年前編輯推噓5(5推 0噓 7→)
留言12則, 4人參與, 7年前最新討論串1/1
板上各位先進大家好 小弟目前用DNase處理total RNA大致流程如下 ========================================= RNA使用trizol/phenol/chloroform萃取後 取上層液體後，沉澱→離心→乾燥→回溶 然後再加入DNase 37度C 20min 再度使用phenol/chloroform萃取(去除DNase) 取上層液體→沉澱→離心→乾燥→回溶 ========================================== 過程繁複費時 如果我在第一次上層液體中 直接加入DNase 37度C 20min 再使用phenol/chloroform萃取 取上層液體→沉澱→離心→乾燥→回溶 (節省一次沉澱、離心、乾燥的過程) 請問這樣處理是否可行？ 或是板上先進們有更好的方法呢？ 感謝各位！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.121.200.159 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1509081388.A.317.html
推
10/27 13:51, 7年前 , 1F
看你要做什麼用途吧…如果是要做RT，通常用加熱就可以把
10/27 13:51, 1F
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10/27 13:51, 7年前 , 2F
DNase給幹掉了。
10/27 13:51, 2F
推
10/27 14:11, 7年前 , 3F
應該不是不行,不過要注意反應的條件,RNA用的Trizol
10/27 14:11, 3F
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10/27 14:12, 7年前 , 4F
比較酸,DNase要pH7左右,所以....如果有辦法調的話
10/27 14:12, 4F
推
10/27 14:15, 7年前 , 5F
我覺得可以查查看那些one-step的kit怎麼弄的
10/27 14:15, 5F
我要轉cDNA然後上qPCR 我會先測試一批樣本看看 再來就是去查one-step kit的資料 感謝你們！ ※ 編輯: Illusings (140.121.200.159), 10/27/2017 15:59:37
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10/27 19:45, 7年前 , 6F
試用過抽完RNA 直接加DNase反應 然後終止 接著直接加
10/27 19:45, 6F
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10/27 19:45, 7年前 , 7F
RTase轉cDNA的kit 印象上realtime的效果ok 缺點是一
10/27 19:45, 7F
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10/27 19:45, 7年前 , 8F
次只能翻500ng 使用上方便不少 但是價格沒印象了 XD
10/27 19:45, 8F
推
10/27 20:46, 7年前 , 9F
DNase處理完再使用phenol/chloroform萃取跟本是冗步，建
10/27 20:46, 9F
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10/27 20:46, 7年前 , 10F
議你把DNase I的使用說明看一下
10/27 20:46, 10F
推
10/27 21:06, 7年前 , 11F
用TURBO的話是可以省不少步，但是通常還是會接酒精沉澱
10/27 21:06, 11F
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10/27 21:07, 7年前 , 12F
如果照他的protocol是5分鐘終止反應，1.5分鐘離心，結束
10/27 21:07, 12F
謝謝以上各位的建議 turbo看起來很方便，趕緊來去訂一套XDDD ※ 編輯: Illusings (1.169.70.199), 10/28/2017 21:55:36
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