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[求救] DNA電泳 GAPDH band歪

看板Biotech (生命科學)作者 (blueberrytv)時間7年前 (2017/11/10 11:32), 7年前編輯推噓3(3推 0噓 11→)
留言14則, 7人參與, 7年前最新討論串1/1
各位先進好 小弟日前在做DNA 電泳時 發現GAPDH的band歪歪的形狀也很奇怪 https://i.imgur.com/zq5ibi1.jpg
因為當天是跑同濃度的兩片膠 都是2% 100V 跑25分鐘左右 配膠和電泳槽都是用的是新的TBE 第一片跑的目標基因band是正常的 於是懷疑是前一片膠剛跑完buffer溫度太高 隔天同一批sample單獨再跑一次GAPDH 這次改為50V 跑的時間拉長 跑出來的band還是歪歪的形狀也不太正常 https://i.imgur.com/g1X2zPZ.jpg
想問各位大大有遇過類似情形 或是有什麼條件我可以再改正嗎 感謝！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 203.71.94.31 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1510284747.A.0DE.html
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11/10 11:48, 7年前 , 1F
看起來是 gel 的 buffer 和電泳槽的 buffer 的不一樣，
11/10 11:48, 1F
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11/10 11:49, 7年前 , 2F
還有每個 sample 的 buffer 似乎也不同造成的
11/10 11:49, 2F
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11/10 11:50, 7年前 , 3F
Gel 的部分可能是配製時蒸發的水沒補或補太多，或者是
11/10 11:50, 3F
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11/10 11:50, 7年前 , 4F
或者是電泳槽的 buffer 放太久蒸發太多水。
11/10 11:50, 4F
謝謝大大～但都是用同一罐buffer唷！
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11/10 12:27, 7年前 , 5F
推測,你PCR取target跟GAPDH相同cycle放大、相同體積跑膠
11/10 12:27, 5F
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11/10 12:28, 7年前 , 6F
當你覺得target正常,這時GAPDH的產物太多,膠圖肯定不好看
11/10 12:28, 6F
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11/10 12:29, 7年前 , 7F
marker其實沒歪,再加上marker這麼弱,所以懷疑是上面因素
11/10 12:29, 7F
好的，很認同大大的看法，會嘗試從這邊下手
推
11/10 14:28, 7年前 , 8F
tracking 都歪掉了 應該換buffer 電泳槽順便洗一下吧
11/10 14:28, 8F
推
11/10 14:30, 7年前 , 9F
然後有tailing 可以load少點會好些
11/10 14:30, 9F
是很久沒洗了哈哈來洗一下，減少loading 的量ok!
推
11/10 16:12, 7年前 , 10F
膠的厚薄不一嗎？
11/10 16:12, 10F
厚薄我覺得是一樣 都用用50ml做的 不知道是不是太厚 ※ 編輯: blueberrytv (203.71.94.31), 11/10/2017 17:34:44
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11/10 18:23, 7年前 , 11F
你用TBS跑agarose??
11/10 18:23, 11F
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11/10 21:42, 7年前 , 12F
問題同樓上，正常不是TAE或TBE嗎？
11/10 21:42, 12F
講錯了 是TBE 已修！
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11/11 17:15, 7年前 , 13F
buffer換TAE吧，然後laoding的量減半，整條跑道都爆了
11/11 17:15, 13F
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11/11 17:17, 7年前 , 14F
然後制膠時候一定要確定煮滾並且均勻
11/11 17:17, 14F
好！感謝大大建議～ ※ 編輯: blueberrytv (203.71.94.31), 11/13/2017 09:27:43
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