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[討論] cell cycle 累積是否等於細胞生長被抑

看板Biotech (生命科學)作者 (boson)時間7年前 (2017/11/15 14:30), 7年前編輯推噓2(2推 0噓 19→)
留言21則, 4人參與, 7年前最新討論串1/1
想請問板上各位大大 最近在做藥物濃度的測試 因為實驗室的cck8沒了 老師要我直接去做單染PI 他說這樣子可以看藥物在某個濃度下 出現的細胞週期某一期累積 就可以順便看細胞生長抑制 我不太懂細胞週期累積會等於生長抑制 而看了很多paper 都是先做cck再做cell cycle 想請問這兩者可以從cell cycle去推cell proliferation嗎？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.9.162.119 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1510727409.A.278.html
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11/15 19:50, 7年前 , 1F
細胞週期有所謂的checkpoint ,當你的藥物可以抑制cdk等
11/15 19:50, 1F
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11/15 19:50, 7年前 , 2F
相關蛋白 ,你的細胞就會大部分停留在某一期,這也代表你
11/15 19:50, 2F
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11/15 19:50, 7年前 , 3F
的細胞無法進行分裂
11/15 19:50, 3F
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11/15 21:26, 7年前 , 4F
你應該要對CCK8與PI的機制或原理有一定程度的瞭解,
11/15 21:26, 4F
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11/15 21:26, 7年前 , 5F
而不是只會用cell proliferation這麼籠統的稱乎
11/15 21:26, 5F
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11/15 21:31, 7年前 , 6F
至於最後一句,只要不上FLOW,答案都是否定的
11/15 21:31, 6F
對這兩個我都了解，但我不太懂的是，flow的圖是靜態的，怎麼可以確定大部分細胞停留 在某一期，就代表不會進行細胞分裂，甚至是細胞週期的速度，因為我並不知道下個時間 點的細胞週期狀況 ※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 11:16:38
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11/16 12:20, 7年前 , 7F
與control相比，就會知道正常情況下細胞週期的分布，加藥後
11/16 12:20, 7F
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11/16 12:21, 7年前 , 8F
如果細胞週期分布改變，就可推論是藥物影響細胞週期的速度
11/16 12:21, 8F
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11/16 12:21, 7年前 , 9F
當細胞週期花費時間不同，生長也會受到影響
11/16 12:21, 9F
但如果說藥物並沒有抑制cell cycle,而是促進apoptosis，那做單染PI跑flow的情況下， 是否圖形會沒差別，但實際上細胞生長狀況是下降的？ ※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 18:37:46 抱歉我有點多問題QQ ※ 編輯: boy12345761 (101.9.162.119), 11/16/2017 18:38:31
推
11/16 18:51, 7年前 , 10F
apoptosis的話你有機會會看到sub-G1 = 肚破腸流的細胞
11/16 18:51, 10F
可是若肚破腸流的太誇張，是不是酒精固定前就不會被離心下來了？
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11/16 18:51, 7年前 , 11F
flow的圖是靜態，但當你做time-dependent不就動態了嗎
11/16 18:51, 11F
※ 編輯: boy12345761 (180.204.16.102), 11/16/2017 23:54:41
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11/17 00:08, 7年前 , 12F
你的疑問都不算是困擾,就像你藥物會探討"處理濃度",同樣的
11/17 00:08, 12F
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11/17 00:08, 7年前 , 13F
在flow實驗,怎麼就忽略了必須觀察不同時間變化的原則?
11/17 00:08, 13F
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11/17 00:15, 7年前 , 14F
做CCK8時讀值都放對照,擔憂flow實驗的那些也必然會有
11/17 00:15, 14F
推
11/17 01:30, 7年前 , 15F
上flow最一開始應該會圈選細胞大小及顆粒性正常的細胞進行
11/17 01:30, 15F
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11/17 01:30, 7年前 , 16F
分析，所以pi染色的 sub-g1應該是細胞大小正常 但是染色體
11/17 01:30, 16F
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11/17 01:30, 7年前 , 17F
斷裂要走向死亡的細胞，這部分細胞也可以被離心下來的。
11/17 01:30, 17F
可是如果late-apoptosis 細胞膜外翻，染色體通通丟出來了，這樣在pbs懸浮細胞後離心 時，會不會離心不下來，late-apoptosis就看不到了，可以用這個方式來看apoptosis而 決定藥物濃度嗎？ ※ 編輯: boy12345761 (180.204.16.102), 11/18/2017 00:13:38
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11/18 02:20, 7年前 , 18F
你說的情況細胞應該已經不完整，就算離下來，可能會被當成
11/18 02:20, 18F
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11/18 02:20, 7年前 , 19F
雜訊排除，此外要看細胞凋亡 要用annexin 及pi雙染才可判定
11/18 02:20, 19F
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11/18 02:20, 7年前 , 20F
。
11/18 02:20, 20F
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11/18 02:23, 7年前 , 21F
要抓IC50，還是用MTT之類的抓大範圍作圖比較好判定
11/18 02:23, 21F
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