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[求救] 基轉後農桿菌無法根除

看板Biotech (生命科學)作者時間7年前 (2018/01/31 17:31), 編輯推噓2(2推 0噓 12→)
留言14則, 3人參與, 7年前最新討論串1/2 (看更多)
想請問一下， 我做植物的基因轉殖， 是用農桿菌感染的轉殖方式。 植物材料是桉樹跟菸草無菌苗的葉片。 感染後兩天葉片周圍會長出細菌， 我加入cefataxin和carbcillin清洗後， 發覺菌量會暴增，之後怎麼洗也很清除乾菌。 最後是菌量過多掩蓋葉片，然後葉片就爛掉死了... 請問有甚麼方法可以解決?(做了一年都沒成果) 如果是菌種汙染，有甚麼方法可以可以解決? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.200.123.37 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1517391091.A.FE1.html
推
01/31 18:28, 7年前 , 1F
組培嗎？ Ti plasmid的resistance gene是什麼？
01/31 18:28, 1F
→
02/01 00:24, 7年前 , 2F
可能感染結束之後沒有洗乾淨吧?
02/01 00:24, 2F
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02/01 00:25, 7年前 , 3F
有菌冒出來就很難救了啊...
02/01 00:25, 3F
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02/01 09:42, 7年前 , 4F
覺得農桿菌超難洗... 也用超音波震盪，但植物組也死了
02/01 09:42, 4F
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02/02 00:20, 7年前 , 5F
唔..那可以請問您都是怎麼洗的嗎?
02/02 00:20, 5F
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02/02 00:28, 7年前 , 6F
或者也可能是感染時間太長，菌長上來了
02/02 00:28, 6F
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02/02 00:29, 7年前 , 7F
菸草的話..我記得感染3-5分鐘，無菌水洗三次，抗生素一次
02/02 00:29, 7F
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02/02 00:30, 7年前 , 8F
無抗生素的培養基培養48小時，然後換到有抗生素的培養基
02/02 00:30, 8F
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02/02 00:35, 7年前 , 9F
參考中研院轉殖植物核心實驗室>實驗方法>轉殖實驗
02/02 00:35, 9F
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02/03 00:50, 7年前 , 10F
感謝解答! 中研院的資料外人可以查閱?
02/03 00:50, 10F
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02/03 00:52, 7年前 , 11F
另外，菸草葉片很薄，會先pre-culture嗎?
02/03 00:52, 11F
推
02/04 23:16, 7年前 , 12F
可以唷，中研院的這個資料是完全公開的~
02/04 23:16, 12F
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02/04 23:17, 7年前 , 13F
請問pre-culture是甚麼 > <?
02/04 23:17, 13F
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02/04 23:18, 7年前 , 14F
我習慣用50 ml離心管洗，無菌水30 ml，用力搖100下
02/04 23:18, 14F
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