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[討論] 關於Tris-HEPES SDS-PAGE?配膠加不加SDS?

看板Biotech (生命科學)作者 (翼天)時間7年前 (2018/04/13 20:23), 7年前編輯推噓7(7推 0噓 17→)
留言24則, 8人參與, 7年前最新討論串1/2 (看更多)
標題可能會誤導， 我想問的問題有兩個： 1. 我的實驗室因為變窮了， 以前都直接用 NuPAGE， 現在為了省錢要自己做膠 (由奢入儉難阿....)， 我想找找看除了 NuPAGE 的 system 以外 (Bis-Tris 也很貴)， 有沒有其它可以讓做好的 SDS-PAGE gel， 或是除了 APS 和 TEMED 以外都加好的 gel buffer 能長期保存的配方， 於是我找到了 Tris-HEPES 這個 system， 這個系統是用 Tris-HEPES 作為 running buffer， Gel 是用 pH 7.0 的 Tris-HCl 作為 buffer， 因為 gel buffer 是中性的所以 gel 做好可以保存很久。 但是除了這篇之外我卻找不到其他 Tris-HEPES SDS-PAGE 配方的資料， 其他找到的都是公司在賣的 pre-cased Tris-HEPES SDS-PAGE， 而且在 Thermo 的網站上還只剩 Tris-HEPES 的 running buffer 有在賣， Pierce 的 Tris-HEPES pre-cased SDS-PAGE 已經停產了。 請問版上有用過 Tris-HEPES 系統的人嗎？ 有連 Tris-HEPES 的 gel 都是自己鑄膠的版友嗎？ 這個 SDS-PAGE 的系統是不是有什麼問題所以停產/沒什麼人用了？ 2. SDS-PAGE 的 gel 配方各有差異， 有些配方只有 stacking gel 中有 SDS， 有些配方則是 stacking 與 resolving gel 中都有包含 SDS， NuPAGE 的 Bis-Tris SDS-PAGE gel 中則是完全不含 SDS， 請問自己配的 gel 中可以完全不含 SDS 嗎？ 是否靠 loading buffer 以及 running buffer 中的 SDS 就足夠了？ 謝謝大家囉～ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.126.39.94 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1523622214.A.77C.html
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04/13 22:33, 7年前 , 1F
看起來是不是只要有便宜的precast,就不用煩惱配方了?
04/13 22:33, 1F
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04/13 23:48, 7年前 , 2F
再怎麼便宜，也比自己配1片30元左右貴吧
04/13 23:48, 2F
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04/13 23:55, 7年前 , 3F
b 大有推薦的嗎？
04/13 23:55, 3F
推
04/14 00:36, 7年前 , 4F
Tris-glycine系統自己鑄膠也蠻方便的啦
04/14 00:36, 4F
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04/14 00:37, 7年前 , 5F
總共也就6樣東西而已,實驗室工作分一分一下就配好了
04/14 00:37, 5F
但是我想要一次配好幾片放著， 知後要用再拿出來用。 我個人很不喜歡配藥.....
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04/14 01:34, 7年前 , 6F
我不喜歡缺乏濃度可調性的precast,所以沒記過實際價格
04/14 01:34, 6F
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04/14 01:34, 7年前 , 7F
找一下有往來廠商的DM有提到一片約200~250元,跟NuPAGE的
04/14 01:34, 7F
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04/14 01:36, 7年前 , 8F
600元比是便宜不少,至於大量客製化廠商一時想不起來
04/14 01:36, 8F
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04/14 01:37, 7年前 , 9F
另外如果要長期保存,只加APS/TEMED的產品也有
04/14 01:37, 9F
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04/14 01:37, 7年前 , 10F
EZ gel solution之類的關鍵字找找
04/14 01:37, 10F
可是 gel 還是不能長期保存阿...
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04/14 01:40, 7年前 , 11F
補充一下,包括NuPAGE我都沒試過,不知道價格之外的實際優劣
04/14 01:40, 11F
推
04/14 09:53, 7年前 , 12F
Biorad TGX FastCast 一片約150我都覺得貴了，竟然還有更
04/14 09:53, 12F
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04/14 09:53, 7年前 , 13F
貴的！
04/14 09:53, 13F
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04/14 10:10, 7年前 , 14F
另外也有Bionovas的只要A+B即可鑄膠，不需APS與TEMED，約5
04/14 10:10, 14F
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04/14 10:10, 7年前 , 15F
到10分鐘就凝固，鑄膠動作要快，一片約72元，可問問萬旺
04/14 10:10, 15F
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04/14 10:10, 7年前 , 16F
拿試用
04/14 10:10, 16F
推
04/14 10:23, 7年前 , 17F
由奢入儉難啊...
04/14 10:23, 17F
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04/14 10:25, 7年前 , 18F
以上都一般Tris-glycine buffer即可，但Biorad可飆高電壓
04/14 10:25, 18F
Tris-HEPES 系統號稱 120V 可以只跑 45 分鐘。
推
04/14 18:43, 7年前 , 19F
自產自推，台製GoPAGE。
04/14 18:43, 19F
GoPAGE 我家有買(NuPAGE 太貴所以後來換 GoPAGE)， 但是我拿 GoPAGE 做 Western 和銀染都比 NuPAGE 糟很多......
推
04/14 20:33, 7年前 , 20F
由儉入奢也…不容易啊 XDD
04/14 20:33, 20F
呃....所以版上都沒有用過 Tris-HEPES 的版友可以分享經驗嗎？ 看來我只能自己配來試試看了..... ※ 編輯: xxtomnyxx (120.126.39.94), 04/14/2018 20:59:54
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04/14 22:03, 7年前 , 21F
呃...Biorad號稱300V跑20分鐘結束 http://bit.ly/2HnCjiY
04/14 22:03, 21F
推
04/15 00:24, 7年前 , 22F
覺得GoPAGE 哪裡不好呢？可以私信告訴我嗎？我們會好好改進
04/15 00:24, 22F
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04/15 00:24, 7年前 , 23F
的…
04/15 00:24, 23F
推
05/05 01:53, 7年前 , 24F
nupage有一片600?
05/05 01:53, 24F
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