[求救] 細胞打散後放一陣子後嚴重成團無法解決

看板Biotech (生命科學)作者steve42125 (Shiburin)時間6年前 (2018/11/19 17:44)推噓5(5推 0噓 5→)

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大家好不好意思又來求救了最近在做細胞實驗時細胞嚴重抱團的情形一直大大的困擾我已經崩潰到欲哭無淚的地步細胞是NSCLC的H1299 實驗步驟是這樣的以0.5ml trypsin-EDTA消化大約3min之後以1.5ml medium中和離心1250rpm, 5mins後去除上清以適當比例打散打散的方法是會先用200ul pipette打大概30次再以1ml pipette取1ml medium再打大約20次之後依pellet大小稀釋進行細胞記數因為一次手上有3個clone會同時處理會全部打散完之後各取10ul進行細胞記數所以從取完到全部數完和計算之後大概會花10分鐘情況大概是這樣在Counting chamber底下看沒有任何異狀，細胞顆顆分明但是種到6cm或10cm dish之後會發現細胞嚴重抱團，幾乎是一串串葡萄裝在盤子裡的感覺有試過拿Autopipette把盤中的液體全部吸起再pipetting幾次(但是很抖很怕噴出來) 去顯微鏡下以8字搖大約15趟左右搖勻後看有散開，想說靜置個5~10分鐘左右再移到incubator 但大概5分鐘多之後再回去看細胞又全部抱成一坨想問問大家有沒有什麼意見或想法或是覺得我可以改進的地方希望能在離心收完細胞的時候就能把細胞完全打散然後希望盡量能不用到autopipette，因為覺得塑膠tip有點浪費..... (雖然我開始覺得好像無可避免了.....) 畢竟種到dish才發現抱團，也不知道是不是一開始就沒打散會讓後續的細胞記數很不準，實驗根本沒辦法進行...... 希望大家救救我，被這個問題已經困擾到頭痛胃痛了QQ 先謝謝大家！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 120.126.49.182 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1542620691.A.E4A.html

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tynse71864

11/19 21:07, 6年前 , 1^F

11/19 21:07, 1^F

可是已經Trypsin到細胞都有變圓圓的，輕拍也都有一部份的細胞飄下來了用medium沖也可以容易洗下來，這樣還要再增加時間嗎? 怕細胞會受損QQ

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iyorain

11/19 21:30, 6年前 , 2^F

11/19 21:30, 2^F

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iyorain

11/19 21:30, 6年前 , 3^F

11/19 21:30, 3^F

因為我在顯微鏡下剛搖完的等液面靜止後看都是一顆一顆的是靜置之後才會成團，而且團塊也是均勻分布，這樣還會跟搖的手法有關嗎? ※ 編輯: steve42125 (36.224.9.103), 11/19/2018 21:51:44