[求救] 請問如何設計用Elisa做蛋白質定量的assay

看板Biotech (生命科學)作者 (馬克斯)時間5年前 (2019/04/02 21:48), 5年前編輯推噓15(15011)
留言26則, 9人參與, 5年前最新討論串1/1
小弟目前用昆蟲細胞表現一個外源蛋白 但是因為前面的人沒有設計任何tag 所以基本上無法純化出來該蛋白定量 但是我們的實驗後段需要的樣品純度 不需要很高 但需要知道該蛋白的總量 想來想去好像只能用ELISA 做定量 可能比較準一點 實驗室剛好也有 該蛋白的單株抗體跟多株抗體 請問有前輩設計過類似蛋白質定量assay 或是有相關文獻可以參考嗎? 感謝:) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 117.19.136.162 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1554212924.A.9C5.html

04/02 22:34, 5年前 , 1F
ELISA會放大 沒tag 不代表不能純化啊......
04/02 22:34, 1F

04/02 23:07, 5年前 , 2F
硫酸銨或是陰陽離子交換法都可以純化XD
04/02 23:07, 2F

04/02 23:09, 5年前 , 3F
管柱很多,還有size-exclusive可以選
04/02 23:09, 3F

04/02 23:10, 5年前 , 4F
而且也不是affinity就比較純(幹
04/02 23:10, 4F

04/02 23:32, 5年前 , 5F
表現量夠高 多過幾根column總是可以純化的 不過你要
04/02 23:32, 5F

04/02 23:32, 5年前 , 6F
建standard curve可能還是得要MS或AAA
04/02 23:32, 6F

04/03 01:42, 5年前 , 7F
利用western blot推估濃度?
04/03 01:42, 7F

04/03 15:47, 5年前 , 8F
樓上western跟elisa一樣 你得知道多少protein是多大
04/03 15:47, 8F

04/03 15:47, 5年前 , 9F
根的band才行
04/03 15:47, 9F

04/03 15:55, 5年前 , 10F
做序列稀釋可以得到相對標準曲線,頂多就這樣
04/03 15:55, 10F

04/03 15:56, 5年前 , 11F
取總蛋白量跟吸光值畫圖,有這個curve也是可以
04/03 15:56, 11F

04/03 17:32, 5年前 , 12F
考量到你要去測某種分析,勢必要提供mock當control。如果
04/03 17:32, 12F

04/03 17:32, 5年前 , 13F
你終究要知道量跟純度,不如現在就開始想純化方法
04/03 17:32, 13F

04/03 18:29, 5年前 , 14F
先想純化方法吧 總要先有標準濃度才能去做減量線 ELIS
04/03 18:29, 14F

04/03 18:29, 5年前 , 15F
A WB MS只是detection 而已
04/03 18:29, 15F

04/03 18:31, 5年前 , 16F
而且你有單株 大不了下重本直接conjugate beads去跑af
04/03 18:31, 16F

04/03 18:31, 5年前 , 17F
finity
04/03 18:31, 17F

04/04 10:32, 5年前 , 18F
有抗體,可以做pull down assay去抓
04/04 10:32, 18F
目前有commercials 已知濃度的目標蛋白可以當elisa standard control 請問這樣子可 以設計elisa assay來抓 cell lysate的目標蛋白濃度嗎?抱歉之前幾乎沒有elisa的經驗 ,還請賜教,謝謝各位前輩! ※ 編輯: Marcus2014 (115.82.38.101), 04/07/2019 10:35:39

04/07 12:36, 5年前 , 19F
是可以啦,不過為什麼不買這個做實驗就好?
04/07 12:36, 19F

04/07 23:33, 5年前 , 20F
你買得到standard sample夠純就跑BCA就好啦 浪費兩個
04/07 23:33, 20F

04/07 23:33, 5年前 , 21F
小時跑elisa幹嘛 傻傻的
04/07 23:33, 21F

04/07 23:33, 5年前 , 22F
然後對啊買得到幹嘛自己純化
04/07 23:33, 22F

04/12 00:46, 5年前 , 23F
買現成的比就好了
04/12 00:46, 23F

04/13 14:08, 5年前 , 24F
BCA加一票
04/13 14:08, 24F

04/29 13:53, 5年前 , 25F
ELISA是screen用的 不要砸自己的腳 簡單coomassie blue
04/29 13:53, 25F

04/29 13:54, 5年前 , 26F
跟commercial的對照先 純度也可以
04/29 13:54, 26F
文章代碼(AID): #1SesWyd5 (Biotech)
文章代碼(AID): #1SesWyd5 (Biotech)