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[求救] invasion assay

看板Biotech (生命科學)作者 (ccc)時間5年前 (2019/05/03 16:49), 5年前編輯推噓3(3推 0噓 20→)
留言23則, 2人參與, 5年前最新討論串2/2 (看更多)
各位好 由於最近要做transwell invasion assay 但是不知道為什麼，細胞種在matrigel上24小 時之後都會變成白色的沉澱，各個濃度都試過了，也在96well上鋪膠試過，細胞都有貼， 但在transwell上就無法，想拜託大家幫幫忙！ 以下是我的protocol,用的細胞是4T1 1.將matrigel以1:3 ,1:5, 1:7 稀釋，並coating 50ul在insert上，放37度24H 2.將細胞種在transwell上室， 5＊10^4/100ul in serum free medium 3.下室加500ul 10%FBS medium 隔天看就發現沉澱了，也沒有細胞穿過 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.54.111 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1556873340.A.381.html
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05/07 23:27, 5年前 , 1F
實驗室之前有人作過嗎？我的方法是1：10稀釋，coating 100
05/07 23:27, 1F
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05/07 23:27, 5年前 , 2F
ul，37度放30min，用tip吸掉多的，再放細胞
05/07 23:27, 2F
沒有人做過耶，我之前試過1：10，但感覺不太成膠耶，很水漾，而且我是放24小時QQ， 另外想請問一下您用的t ranswell是什麼牌子呢？我是corning的，不好意思麻煩您了！ ※ 編輯: sianpa00 (140.112.4.206), 05/08/2019 13:54:30 ※ 編輯: sianpa00 (140.112.4.206), 05/08/2019 13:55:45
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05/09 23:03, 5年前 , 3F
是的1：10還會是很像液態的，我也是corning的
05/09 23:03, 3F
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05/09 23:12, 5年前 , 4F
google得到corning的protocol，雖然我也是看前人的
05/09 23:12, 4F
好的，感謝，那我再試試看1：10的，那可以請問一下,30分鐘後吸掉，不會幾乎沒有matr igel嗎？ ※ 編輯: sianpa00 (140.112.54.111), 05/10/2019 11:33:13
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05/10 12:26, 5年前 , 5F
理論上孔洞有就可以了
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05/10 12:28, 5年前 , 6F
如果是明顯的一層不就會變成在transwell上做tube formatio
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05/10 12:28, 5年前 , 7F
n了嗎？我猜你的細胞是不會行成tube的所以你才會只看到細
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胞沉澱
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05/10 12:30, 5年前 , 9F
不過建議還是找corning的protocol看一下，老闆問起來也才
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05/10 12:30, 5年前 , 10F
有個依據
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然後爬過去的細胞會是transwell的另一面，我的經驗是不太
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05/10 12:40, 5年前 , 12F
會在下層medium中，所以你如果是看medium或下面的well是不
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05/10 12:40, 5年前 , 13F
太會有細胞的
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感謝你，我會把matrigel鋪少一點試試看，不好意思麻煩您！ ※ 編輯: sianpa00 (223.136.86.184), 05/13/2019 10:08:23 不好意思再請問一下，我最近照您的步驟做，有做出來，但是吸出多的matrigel的時候， 幾乎整個吸光了，這樣是否不太正常 感覺好像根本沒有成膠，我還把時間拉長到1h ※ 編輯: sianpa00 (114.136.246.122), 05/19/2019 11:45:39
推
06/12 00:22, 5年前 , 14F
我之前做invasion是用80ug/mL的濃度（用medium稀釋matri
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06/12 00:22, 5年前 , 15F
gel）然後37C coating過夜，沒有吸除多餘的
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06/12 00:24, 5年前 , 16F
查了一下當時收到的Matrigel原液濃度為9.6mg/mL 我是先
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推
06/12 00:26, 5年前 , 17F
1:1稀釋成4.8mg/mL的stock全部分裝完，一次拿一管出來再
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06/12 00:26, 5年前 , 18F
稀釋成80ug/mL的working sol做coating
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06/12 00:27, 5年前 , 19F
一開始分裝就先算好每次只拿一管出來的量（稀釋後體積務
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06/12 00:28, 5年前 , 20F
必超過你實際要用的總體積避免氣泡和pipetting error）
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06/12 00:28, 5年前 , 21F
以稀釋倍率來看的話是120倍稀釋呢 所以原液濃度很重要
06/12 00:28, 21F
不好意思 現在才看到回覆，80ug/ml,超稀的耶，我目前是用400ug/ml左右，大概是1：20 稀釋，37度放到乾，之前看paper太擔心matrigel過稀，也許就是原液濃度不同？ 看來好 像多慮了！ 謝謝你們的幫忙！ ※ 編輯: sianpa00 (140.112.54.111 臺灣), 06/24/2019 15:04:36
推
08/24 02:05, 5年前 , 22F
濃度越高那層膠會越硬，硬的話細胞吃不掉就穿不過了不是
08/24 02:05, 22F
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08/24 02:05, 5年前 , 23F
嗎？@@
08/24 02:05, 23F
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[求救] invasion assay
iosteven
14年前, 09/28
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