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[求救] 一題生化實驗相關

看板Biotech (生命科學)作者 (尖頭拉瑞)時間5年前 (2019/05/15 15:41), 編輯推噓12(12推 0噓 18→)
留言30則, 6人參與, 5年前最新討論串1/1
做作業時一直對這題很沒有頭緒，教授給的提示是BL21-star跑膠結果不太對(但我看不出 來？)想請教板上大神的想法跟答案。 先謝謝各位 https://i.imgur.com/OV2p6DC.jpg
-- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.137.62.199 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1557906087.A.F9D.html
推
05/15 16:43, 5年前 , 1F
這什麼題目...你們連expression cell line的genotype
05/15 16:43, 1F
→
05/15 16:43, 5年前 , 2F
都要背喔= =
05/15 16:43, 2F
推
05/15 16:46, 5年前 , 3F
然後用的plasmid 系統沒講，蛋白大小也沒寫 這出題是
05/15 16:46, 3F
→
05/15 16:46, 5年前 , 4F
要問什麼= =
05/15 16:46, 4F
推
05/15 17:34, 5年前 , 5F
這是作業所以是不用背的吧 樓上很激動XD
05/15 17:34, 5F
推
05/15 17:36, 5年前 , 6F
我覺得關鍵在這幾個strain的差異 bl21是沒有內建T7的
05/15 17:36, 6F
→
05/15 17:36, 5年前 , 7F
star其實是商標這個不太好 type是BL21DE3 內建T7 ros
05/15 17:36, 7F
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05/15 17:36, 5年前 , 8F
etta則是codon optimised for eukaryotic gene
05/15 17:36, 8F
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05/15 17:37, 5年前 , 9F
所以control的band要嘛是leaky expression要嘛是size
05/15 17:37, 9F
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05/15 17:37, 5年前 , 10F
很像的其他protein
05/15 17:37, 10F
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05/15 17:38, 5年前 , 11F
看起來只有de3真的有被induce 推理plasmid backbone是
05/15 17:38, 11F
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05/15 17:38, 5年前 , 12F
iptg推的T7 promoter
05/15 17:38, 12F
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05/15 17:39, 5年前 , 13F
然後loading control滿糟的 很難比較不同lane之間
05/15 17:39, 13F
推
05/15 17:42, 5年前 , 14F
所以也有可能是de3完全沒有被induce 看到的差異只是lo
05/15 17:42, 14F
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05/15 17:42, 5年前 , 15F
ading不同 然後要嘛是iptg完全沒有作用因為promoter
05/15 17:42, 15F
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05/15 17:42, 5年前 , 16F
不是t7 或是全部都被推到inclusion body或是被degrade
05/15 17:42, 16F
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05/15 17:42, 5年前 , 17F
掉了
05/15 17:42, 17F
推
05/15 17:43, 5年前 , 18F
好你可以設計實驗測試這些了
05/15 17:43, 18F
推
05/18 02:34, 5年前 , 19F
是不會跑western喔... 咦？
05/18 02:34, 19F
推
05/18 21:55, 5年前 , 20F
教授說的是star的結果"不太對"還是"不一樣"?
05/18 21:55, 20F
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05/18 21:56, 5年前 , 21F
如果有做WB,以誘導表現的角度來看,star是比較好的
05/18 21:56, 21F
→
05/18 21:58, 5年前 , 22F
不同表達系統會不一樣正常,選需要的才是一般想法
05/18 21:58, 22F
推
05/18 22:01, 5年前 , 23F
如果真的是要問I大講的問題,這個問題設計確實蠻爛的
05/18 22:01, 23F
推
05/18 22:04, 5年前 , 24F
表現不一致? 管他一致不一致,我選可溶蛋白質多的
05/18 22:04, 24F
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05/18 22:05, 5年前 , 25F
問題應該改成,genotype為何會造成表現上的差異
05/18 22:05, 25F
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05/18 22:06, 5年前 , 26F
以及小明該如何驗證這點,做個WB跟loading control吧
05/18 22:06, 26F
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05/18 22:57, 5年前 , 27F
怎麼樣都是先抽個mini送定序吧...
05/18 22:57, 27F
推
06/01 19:00, 5年前 , 28F
除非你的老師上課有教這幾株菌種的特性或是告訴你一些前
06/01 19:00, 28F
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06/01 19:00, 5年前 , 29F
提，要不然這問題沒啥意義，可能發生問題的端點不少。
06/01 19:00, 29F
推
06/18 17:35, 5年前 , 30F
小明技術不好
06/18 17:35, 30F
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