Re: IHC染色脫水封片問題已刪文

看板Biotech (生命科學)作者enjorus (Vocalise)時間4年前 (2020/05/14 07:13)推噓2(2推 0噓 3→)

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抱歉我直接回文好了。 Fast red是染細胞核的，可以用來代替hematoxylin。所以我有點不太懂你的問題。就我的經驗，它的顏色有點弱。以vector賣的counterstaing dyes來說，顏色易辨別度是： hematoxylin > fast red >> methyl green 如果是偏紅色的呈色劑的話，我很偏好DAB substrate用NovaRed。它是磚紅色的，非常好看又漂亮。若是AP substrate，vector Red看起來較暈染，水水的感覺。所以我可能要先請你確認你用的 "紅色"是指什麼。脫水部份大概的過程是： 50% EtOH -> 70% or 75% EtOH -> 80% or 85% EtOH -> 95% EtOH -> 100% EtOH, 2 -3 次 -> Xylene，3 次 -> 封片我個人偏好：酒精： 50% -> 75% -> 85% -> 95% -> 100% -> 100% 趕時間就都3分鐘各一次，然後最後一次100%酒精5分鐘。之後xylene都是5分鐘，直接封片。有些lab會不脫水直接放hood 吹乾第二天直接封片；也有lab不會像我做那麼多步酒精，做完就封片；我也聽過最後一缸xylene結束後放hood 吹乾再封片。這些都是看實驗室習慣。但我的做法是大學學病理染色時學的，對石蠟或冷凍切片效果都很好。漸進式的脫水（覆水也是）比較不會對組織造成形態影響，特別是有些切較厚的冷凍切片。非水溶性封片膠多半都是在xylene裡面，所以我過完xylene就直接封片了。一來我沒耐性再等它吹乾；二來就原理來講，吹乾再滴封片膠封片根本莫名其妙；三來比較不會有肉眼直接看看不到的小氣泡卡在組織的管狀結構裡。若你願意的話，我很建議去找本染色的書或是一些網站上的資訊了解一些原理，每一項試劑是做什麼用的，有沒有什麼可以替代的選項，這樣可能在聽了很多學長姐及網友們各種相似卻分歧的建議後，你自己也較能明白那些步驟是關鍵，條件決不能改；又有那些是大概大概就可以的。然後一定要養成習慣看kit的說明書。 ※ 引述《qaz3468 (什麼)》之銘言： : 各位好，第一次發文，如果有違反的地方還請麻煩糾正>< : 最近使用大鼠肺部的石蠟切片4um 染IHC stain : 想請問各位最後都是如何脫水封片？ : 我們實驗室先前的protocol是寫 : 85%酒精3分>95%酒精3分>100%酒精3分*3>xylene5分*3>封片 : 但最近發現梯度酒精脫水之後有一個呈色劑會掉色, 顯微鏡下看signal都不見了（vector : 的 fast red 有人也用過這個嗎？） : 最近用100%3分*3發現好像就沒有掉色，但好像有脫水沒脫乾淨的感覺？ : 然後四處跟別人討論之後發現其他實驗室的IHC染色完後泡完xylene會先在hood內抽乾， : 再封片！ : 但我們之前都是梯度酒精泡完再泡xylene擦乾玻片背面沒風乾就直接封片了...（學姐還 : 說不可 : 以讓玻片乾掉） : 想請問一下大家在最後的步驟都是怎麼做的 : 若是我xylene完直接風乾會讓組織顏色變深嗎？（或是是否會影響hematoxylin的顏色） : 另外風乾完會再浸泡xylene再封片嗎？我們實驗室的封片膠含有xylene! : 再麻煩各位幫忙解答>< 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 24.47.228.88 (美國) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1589411600.A.DD3.html

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