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[求救] 細胞培養問題

看板Biotech (生命科學)作者 (老兄你不酷喔)時間1年前 (2023/09/08 15:39), 編輯推噓8(8推 0噓 25→)
留言33則, 10人參與, 1年前最新討論串1/1
想問板上各位大師 小弟日前在養 fibroblast 但是一顆細胞體積大 種細胞的時候種不了這麼多 6well 裡面大概只能種 1x10^5個 （太多會爆掉） 但是收細胞的時候protein跟RNA濃度很低 想問有什麼方法可以解決嗎 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.10.93.107 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1694158792.A.DA1.html
推
09/08 17:27, 1年前 , 1F
那就種6公分或10公分盤啊
09/08 17:27, 1F
推
09/09 21:08, 1年前 , 2F
樓上正解。另外濃度看甚麼實驗要用的，收太多最後也
09/09 21:08, 2F
→
09/09 21:08, 1年前 , 3F
是沒用丟冰箱，然後……沒有然後了。
09/09 21:08, 3F
推
09/11 01:14, 1年前 , 4F
同上，量不夠就多養一些，加大面積加大盤數都可
09/11 01:14, 4F
→
09/11 01:14, 1年前 , 5F
以，另外問一下total protein量呢？也有可能是你
09/11 01:14, 5F
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09/11 01:14, 1年前 , 6F
lysis buffer加太多
09/11 01:14, 6F
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09/11 09:56, 1年前 , 7F
一盤不夠, 你有沒有種兩盤
09/11 09:56, 7F
推
09/11 11:56, 1年前 , 8F
用10cm盤子養 6well不是用來養細胞抽核酸或蛋白的
09/11 11:56, 8F
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09/11 12:33, 1年前 , 9F
別亂教,6well是transfection reagent常用來示範、抽取RNA
09/11 12:33, 9F
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09/11 12:35, 1年前 , 10F
跟蛋白進行分析的範例,自覺得細胞不夠調整大小就好
09/11 12:35, 10F
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09/11 16:10, 1年前 , 11F
在我這裡 24-well 才是常態，抽RNA做qPCR、抽蛋白質做
09/11 16:10, 11F
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09/11 16:11, 1年前 , 12F
western 也沒什麼問題。種多少多大盤本來就是看細胞種
09/11 16:11, 12F
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09/11 16:12, 1年前 , 13F
類，沒有什麼 dish 或 plate 不是拿來養細胞抽核酸或蛋
09/11 16:12, 13F
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09/11 16:12, 1年前 , 14F
白這種事
09/11 16:12, 14F
推
09/12 11:59, 1年前 , 15F
需求量取決於實驗。以QPCR來說，1 ug的total RNA翻
09/12 11:59, 15F
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09/12 11:59, 1年前 , 16F
成cDNA再做QPCR，全部做完手會軟到不行，所以收太多
09/12 11:59, 16F
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09/12 11:59, 1年前 , 17F
剩下來的也是浪費。Protein lysate for WB 1-20 tota
09/12 11:59, 17F
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09/12 11:59, 1年前 , 18F
l protein per well, 除非做IP才可能需要0.5-1 mg。f
09/12 11:59, 18F
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09/12 11:59, 1年前 , 19F
ibroblast也不是什麼特別難搞的細胞，所以問題可能在
09/12 11:59, 19F
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09/12 11:59, 1年前 , 20F
於不知道需要多少或是稀釋太稀。
09/12 11:59, 20F
推
09/22 21:25, 1年前 , 21F
身為實驗人員，提問也不先講實驗方法跟所謂濃度太低是多少?
09/22 21:25, 21F
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09/22 21:26, 1年前 , 22F
樓上人都太好了吧
09/22 21:26, 22F
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09/22 21:32, 1年前 , 23F
這樣誰知道是哪一步出問題
09/22 21:32, 23F
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09/22 21:34, 1年前 , 24F
而且光fibroblast種1X10^5 會爆掉就很怪
09/22 21:34, 24F
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09/22 21:34, 1年前 , 25F
看需求密度而定一個6wellplate的well收到2-3X10^5應該OK
09/22 21:34, 25F
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09/22 21:36, 1年前 , 26F
抽protein或RNA綽綽有餘
09/22 21:36, 26F
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09/22 21:37, 1年前 , 27F
實驗方法跟目的仔細寫出來，這邊一堆厲害的人才幫的到你
09/22 21:37, 27F
推
09/23 15:44, 1年前 , 28F
如果細胞狀況一切正常，這個細胞數下收起來還會不夠做
09/23 15:44, 28F
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09/23 15:44, 1年前 , 29F
可能的原因就是lysis不完全
09/23 15:44, 29F
推
09/23 20:37, 1年前 , 30F
連RNA濃度都很低感覺就是細胞數不足耶 真的資訊太少 種
09/23 20:37, 30F
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09/23 20:37, 1年前 , 31F
超過1x10^5會爆掉也很難而理解
09/23 20:37, 31F
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09/25 20:18, 1年前 , 32F
RNA濃度很低會不會是污染嚴重降解
09/25 20:18, 32F
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09/25 20:20, 1年前 , 33F
不過猜測也沒用啊，畢竟原po 問完問題就神隱惹
09/25 20:20, 33F
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