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THP-1誘導發炎體

看板Biotech (生命科學)作者 (婧啵)時間1年前 (2023/10/03 21:26), 編輯推噓5(5推 0噓 31→)
留言36則, 4人參與, 1年前最新討論串1/1
請問板上各位大大有沒有人做過THP-1巨噬細胞發炎誘導？ 目前已經有將他分化成巨噬細胞貼盤了 細胞鏡檢狀態沒有太大問題 但以LPS/ATP誘導難以有大量發炎因子產生（目前都只有先測IL-1beta) 現使用 1 ug/mL誘導6小時後添加5 mM ATP培養1小時，是查到相關資料中普遍使用條件 懇求有相關經驗的神人指點一二 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.60.218.173 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1696339615.A.D05.html
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10/05 09:55, 1年前 , 1F
你的檢測方法是什麼？你想看的發炎因子是什麼？你目前
10/05 09:55, 1F
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10/05 09:55, 1年前 , 2F
的誘導方式是讓細胞進行pyroptosis ，也許細胞死光了也
10/05 09:55, 2F
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10/05 09:55, 1年前 , 3F
不一定。單純的給LPS應該就可以誘導發炎了
10/05 09:55, 3F
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10/05 13:17, 1年前 , 4F
目前是以ELISA kit測IL-1beta跟TNF-alpha,確實沒有想過
10/05 13:17, 4F
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10/05 13:17, 1年前 , 5F
焦亡這方面 我下次試試下LPS就好
10/05 13:17, 5F
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10/05 13:18, 1年前 , 6F
另外想請教誘導成功是否會在形態上有明顯變化？變成梭
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10/05 13:18, 1年前 , 7F
形？
10/05 13:18, 7F
推
10/05 14:14, 1年前 , 8F
我自己是用LPS/IFNg誘導細胞變成M1型態，細胞會變的更
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10/05 14:14, 1年前 , 9F
平更大，反而不會是梭狀。
10/05 14:14, 9F
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10/05 14:49, 1年前 , 10F
瞭解～請問您的經驗是加了IFN-gamma才成功嗎？
10/05 14:49, 10F
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10/05 19:31, 1年前 , 11F
我主要是做macrophage的極化，所以給LPS+IFNg, 誘導成M1
10/05 19:31, 11F
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10/05 19:31, 1年前 , 12F
macrophage, 在我的實驗中，NLRP3, IL1b的蛋白質表現
10/05 19:31, 12F
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10/05 19:31, 1年前 , 13F
都蠻明顯的，另外TNFa, IL6的RNA也都有明顯表現。
10/05 19:31, 13F
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10/06 14:24, 1年前 , 14F
瞭解感謝！另外我今天看我分化兩天後的細胞 發現有很多
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10/06 14:24, 1年前 , 15F
空泡產生 可能真的在誘導前就讓細胞死亡了？不知道您會
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10/06 14:24, 1年前 , 16F
不會產生這樣的現象呢 https://i.imgur.com/fZfoS96.jp
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10/06 14:24, 1年前 , 17F
g
10/06 14:24, 17F
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10/24 12:59, 1年前 , 18F
妳的分化條件是什麼呢？我分化之後，沒有像妳那樣的空泡
10/24 12:59, 18F
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10/24 12:59, 1年前 , 19F
10/24 12:59, 19F
推
11/07 14:50, 1年前 , 20F
我inflammasome也是用LPS/ATP刺激, 依你用il1b ELISA測m
11/07 14:50, 20F
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11/07 14:50, 1年前 , 21F
edium中含量看似沒有問題，ATP可以檢查看看有沒有壞，AT
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11/07 14:50, 1年前 , 22F
P也可以換成nigericin。給你參考
11/07 14:50, 22F
推
11/13 02:09, 1年前 , 23F
小弟弱弱借問thp1，前3hr LPS（10ng/ml)刺激後1hr Nig
11/13 02:09, 23F
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11/13 02:09, 1年前 , 24F
ericin (20uM)結果WB看inflammasome 相關分子表現都下
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11/13 02:09, 1年前 , 25F
去，求解～
11/13 02:09, 25F
推
11/13 16:40, 1年前 , 26F
回覆999: 看NLRP3 活化最直接就是去看IL1b 有沒有releas
11/13 16:40, 26F
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11/13 16:40, 1年前 , 27F
e(p20),可以做ELISA或是 medium 的TCA沉澱，最近pyrptos
11/13 16:40, 27F
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11/13 16:40, 1年前 , 28F
is 蠻夯的看GSDMD切割也行，都是CASP1的下游。 做inflam
11/13 16:40, 28F
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11/13 16:40, 1年前 , 29F
asome 活化第一次建議做- -，+-，++（LPS &Nig)的contro
11/13 16:40, 29F
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11/13 16:40, 1年前 , 30F
l 檢查。 如果你加LPS 後NLRP3沒有起來 建議加大濃度或
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11/13 16:40, 1年前 , 31F
放久一點。跟你指導老師或老闆多討論才是最重要的。
11/13 16:40, 31F
推
11/15 14:59, 1年前 , 32F
謝樓上大大，事實上我有試過純加LPS是都有起來的（ex:
11/15 14:59, 32F
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11/15 14:59, 1年前 , 33F
IL-1b, NLRP3)但神奇的地方在於加了Nigericin後，訊號
11/15 14:59, 33F
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11/15 14:59, 1年前 , 34F
是變弱的～ 照理說它是inflammasome 的activator才對
11/15 14:59, 34F
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11/15 14:59, 1年前 , 35F
，甚至GSDMD沒啥變化Q，那個TCA沈殿似乎蠻有意思從沒
11/15 14:59, 35F
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11/15 14:59, 1年前 , 36F
想過～想多了解>< BTW ELISA的結果都跟WB一致（IL-1b)
11/15 14:59, 36F
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