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WB的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (yoyo)時間11月前 (2024/01/06 14:35), 11月前編輯推噓3(3推 0噓 28→)
留言31則, 7人參與, 11月前最新討論串1/1
很久沒有做了，這幾天做了2次，都是上了ECL肉眼可以看到band，但冷光儀完全照不到， 請各位大大解惑 https://i.imgur.com/gNChHyL.jpg
-- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.137.114.160 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1704522937.A.8ED.html
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01/06 16:10, 11月前 , 1F
protocol 沒拿出來是要通靈嗎，我通靈一下應該是一抗或二抗
01/06 16:10, 1F
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01/06 16:10, 11月前 , 2F
太濃
01/06 16:10, 2F
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01/06 17:09, 11月前 , 3F
ECL肉眼可以看到bend就燒掉了吧
01/06 17:09, 3F
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01/06 17:13, 11月前 , 4F
你蛋白下多少？一二抗的濃度是多少？貨號是什麼
01/06 17:13, 4F
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01/06 17:13, 11月前 , 5F
host和size有沒有仔細對照過ref.? ECL什麼等級？
01/06 17:13, 5F
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01/06 17:15, 11月前 , 6F
有沒有壓過ponceau S和gel stain確認transfer效率
01/06 17:15, 6F
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01/06 20:47, 11月前 , 7F
Sample的蛋白質濃度不確定，膠是用10 well，每個load
01/06 20:47, 7F
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01/06 20:47, 11月前 , 8F
20ul，現在用60V跑，再用90V跑，transfer用90V 80mi
01/06 20:47, 8F
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01/06 20:47, 11月前 , 9F
n，Blocking 用5% milk 室溫1hr，1抗:CD-80(gtx04260
01/06 20:47, 9F
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01/06 20:47, 11月前 , 10F
)1:1000 in 5%milk，4度overnight，2抗:rabbit(無貨
01/06 20:47, 10F
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01/06 20:47, 11月前 , 11F
號）1:5000 in 5%milk，室溫1hr，ECL（沒記貨號之後
01/06 20:47, 11F
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01/06 20:47, 11月前 , 12F
補充）
01/06 20:47, 12F
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01/06 20:47, 11月前 , 13F
之後strapping ，Blocking，1抗:GAPDH(abcam) 1:1000
01/06 20:47, 13F
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01/06 20:47, 11月前 , 14F
in 5%milk，4度overnight，2抗:mouse(無貨號）1:100
01/06 20:47, 14F
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01/06 20:47, 11月前 , 15F
0 in 5%milk
01/06 20:47, 15F
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01/06 20:48, 11月前 , 16F
之前另外一位有跑出來，冷光儀有照到，但我是什麼都
01/06 20:48, 16F
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01/06 20:48, 11月前 , 17F
沒照到，肉眼就看得到band
01/06 20:48, 17F
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01/06 20:48, 11月前 , 18F
太久沒做，不確定是不是哪個沒配好
01/06 20:48, 18F
推
01/08 23:27, 11月前 , 19F
先確定冷光儀操作有沒有問題，sample能不能序列稀釋？
01/08 23:27, 19F
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01/08 23:27, 11月前 , 20F
還有internal control 有沒有訊號
01/08 23:27, 20F
推
01/09 16:31, 11月前 , 21F
肉眼可見，大概幾秒就燒掉了
01/09 16:31, 21F
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01/09 19:03, 11月前 , 22F
有一個很蠢但我還真看過有人發生的可能......
01/09 19:03, 22F
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01/09 19:04, 11月前 , 23F
1抗 and/or 2抗完沒有wash就直接加ECL.....
01/09 19:04, 23F
冷光儀操作沒有問題，sample的量是照著前人load，重點是internal control也照不出來 ，每個1抗跟2抗之間都有wash。後來二抗有調整濃度，改1:10000，也完全照不到，肉眼 都看得到，Protocol都是照著前人的，現在已經做到不知道哪裡有問題了 01/10 11:52 ※ 編輯: a9044831108 (223.137.114.160 臺灣), 01/10/2024 11:57:51
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01/10 22:00, 11月前 , 24F
我想猜冷光儀,因為冷光儀已經可以可見光拍,沒必要另開手機
01/10 22:00, 24F
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01/10 22:03, 11月前 , 25F
而且我有超過一整年沒做WB,冷光拍要切換直接忘掉了
01/10 22:03, 25F
推
01/11 23:46, 11月前 , 26F
你是說同時間做有人跑出來你沒有，還是時間有間
01/11 23:46, 26F
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01/11 23:46, 11月前 , 27F
隔？有間隔的話也可能有東西過期壞掉，去跟隔壁
01/11 23:46, 27F
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01/11 23:46, 11月前 , 28F
實驗室借sample和抗體當postive做看看，至少
01/11 23:46, 28F
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01/11 23:46, 11月前 , 29F
internal ctrl要出來確定你的手法和儀器操作沒問
01/11 23:46, 29F
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01/11 23:46, 11月前 , 30F
題，然後才能從材料檢討
01/11 23:46, 30F
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01/11 23:49, 11月前 , 31F
ECL最好也先跟別人借用
01/11 23:49, 31F
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