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[問題] TA cloning

看板Medicine (醫學生物)作者 (柚子)時間13年前 (2010/08/17 23:08), 編輯推噓0(0推 0噓 6→)
留言6則, 2人參與, 最新討論串1/1
最近利用commerial的TA cloning 將需要保存的gene 以profreading Taq PCR 後 切膠純化後 做A- tailing 以kit ligation transform 至DH5a 隔天長出colony 以colony PCR 後得到我想要的產物(~400bp) 但clony養liquid 抽plasmid run PCR 後卻發現 除了目標產物外 有一個很大的band (>3K) 想請問 那個band 雜band嗎? 為什麼colony PCR 跟plasmid DNA PCR 結果會有差異?? 麻煩了 感謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.160
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08/17 23:48, , 1F
TA後的plasmid多大? 取了多少量的plasmid去做PCR?
08/17 23:48, 1F
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08/26 18:39, , 2F
抽完plasmid之後用restriction enzyme check比較好
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08/26 18:39, , 3F
有時候colony PCR會有false positive的情況
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08/26 18:41, , 4F
至於你說的比3K大的產物 你elongation time多久?
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08/26 18:41, , 5F
我推測可能是你elongation time過久 P了一圈
08/26 18:41, 5F
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08/26 18:42, , 6F
另外也有可能你下了太多template 看到的是你的plasmid
08/26 18:42, 6F
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