Re: [問題]關於抽質體DNA的問題
看板Biology (生物學)作者KLAHA (Scars of sabbath)時間21年前 (2004/02/17 20:23)推噓9(9推 0噓 0→)留言9則, 7人參與討論串1/3 (看更多)
※ 引述《citrinin (anticitrinin)》之銘言：
: ※ 引述《wwwjjj (......)》之銘言：
: : 在下是剛進實驗室的新手
: : 目前還是大學生
: : 想請問各位大大
: : 抽plasmid DNA的步驟中
: : 在加入各種buffor,靜置..........
: : 之後有一個步驟:離心後取澄清液
: : 上面的解釋說此澄清液含有plasmid DNA
: : 而沉澱物則包含了genomic DNA, proteins, cell debris, SDS ...
: : 我想請問的是genomic DNA不是細菌除了plasmid外的DNA
: : 兩者同樣是DNA只是大小.形狀的不同
: : 為什麼plasmid DNA會溶解而genomic DNA卻會沉澱下來
: : 不知道這樣形容會不會很模糊
: : thank you:)))
: 一個牛津大學的博士告訴我是被 protein 給'絞'進去的
聽你說法應該是用alkaline lysis
離下菌,去掉broth
soln 1 : GTE
菌的等張液,維持菌的完好
務必使菌完全懸浮
加soln 2：SDS和NaOH
SDS=detergent,破菌
NaOH=使DNA變性(denature),由雙股打開為單股型式
混勻即可,切勿劇烈混合使genome DNA斷裂
加soln 3：加酸(我用醋酸鉀)
中合soln2,務必混合均勻
此時plasmid DNA因片段較短,馬上renature
但genome DNA片段較大,不及馬上renature
離心,捨去懸浮(lipid)&沉澱物(protein,genome DNA等),取出液體
加入100% EtOH沉澱,離心
去除上清液(有genome DNA)
留pellet=plasmid DNA
以70% EtOH wash
乾燥後得plasmid DNA,
溶於適量水或TE buffer內
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.222.64.102
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※ 編輯: KLAHA 來自: 140.112.234.180 (02/19 13:24)
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