Re: [問題]關於抽質體DNA的問題

看板Biology (生物學)作者KLAHA (Scars of sabbath)時間21年前 (2004/02/18 13:38)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《cobainH (穿越無限透明的藍)》之銘言： : 有個疑問 : 都要破菌了為何soln 1還要維持菌的完好 : 印象中是為了破菌耶因為菌的genome DNA是以一端附著於細胞膜上的circular form存在所以要加入GTE G=GLUCOSE~等張,避免菌破(書上是用"prevent cells from brusting") T=Tris~調pH值的buffer E=EDTA~螯合劑,抓陽離子,使DNAse等無法作用且弱化細胞膜 soln 1還可加lysozyme先弱化細胞膜不過GTE是非必要的沒錯,只是習慣...反正有soln 2 soln 1只是弱化菌加入soln 2時菌才破 : 懸浮是為了能和soln 2 反應完全 : 而且應該是三種都加了才離心吧.....??? ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 我打錯了 XD 謝謝~剛更正了 : : 聽你說法應該是用alkaline lysis : : 離下菌,去掉broth : : soln 1 : GTE : : 菌的等張液,維持菌的完好 : : 務必使菌完全懸浮 : : 加soln 2：SDS和NaOH : : SDS=detergent,破菌 : : NaOH=使DNA變性(denature),由雙股打開為單股型式 : : 混勻即可,切勿劇烈混合使genome DNA斷裂 : : 離心,捨去懸浮(lipid)&沉澱物(protein等),取出液體 : : 內有denature之genome及plasmid DNA : : 加soln 3：加酸(我用醋酸鉀) : : 中合soln2,務必混合均勻 : : 此時plasmid DNA因片段較短,馬上renature : : 但genome DNA片段較大,不及馬上renature : : 加入100% EtOH沉澱,離心 : : 去除上清液(有genome DNA) : : 留pellet=plasmid DNA : : 以70% EtOH wash　 : : 乾燥後得plasmid DNA, : : 溶於適量水或TE buffer內 -- 在biology版po文真是件傻事...... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.234.180 ※ 編輯: KLAHA 來自: 140.112.234.180 (02/19 13:23)