Re: [問題]in situ hybridization
※ 引述《chars.bbs@ptt.cc (安分守己)》之銘言：
> ※ 引述《kuuro@kkcity.com.tw ()》之銘言：
> : 如果要偵測的mRNA量可能不多,要用哪種方法好呢?
> real-time PCR 是現今科技最敏感的方法 , FISH不可能
> : 螢光還是酵素labeled的?
> 螢光lable是FISH, AP或HRP應該是成色法吧? 你說哪種會有較佳敏感度
> : 因為我要做RNAi, transfection的效率不夠好,
> : 做RT-PCR 應該看不出來吧?
> : 又沒有抗體可以做免疫染色,
> : 所以想試試in situ hybridization
> 總之Real-time PCR扣除掉人為技術層面還不行的話
> 那就不可能了
> : 還是大家有其他建議嗎?
> : 謝謝!
> 你的問題很矛盾, 做RNAi, transfection的效率不夠好
> 理論上mRNA是比較多的吧? 這時都看不出來
> 那transfection的效率好的時候, 要看啥???
謝謝您的回答,不過您可能有些誤會了,
我目前只是要測試哪個RNAi construct有效,
要看出細胞中的mRNA是否減少,
因為transfection效率不是很好,<10%,(奇怪的是沒transfected的用藥也殺不死)
所以才想看single cell level
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