Re: 請問有關western blotting的問題
※ 引述《fatee.bbs@bbs.ccns.ncku.edu.tw (酒後駕車)》之銘言：
> 我跑western blotting一直跑的很醜...
> 像是在run stacking gel時...sample老是壓不平..
> 或是呈色時整個背景會髒...但是我blocking都overnight..
> 再來就是呈色出來的band會散掉...
> 試了好幾次都這樣...覺得很沮喪....
> 有人可以教教我嗎...--~~
其實跑完膠之後..還可以把transfer完的膠拿去染..看看是不是真的跑的很醜..
transfer的時候..membrane放到膠上盡量不要又抹來抹去..
transfer完Blocking其實30 min就夠了...1抗可以室溫30min~1hr或4度O/N..
一抗完要用PBST/PBS wash 5 min 4~5次..之後下二抗..室溫30min就可以了..
完了一樣要wash..呈色之後..壓片時要一下就放到正確的位子..不要又抹來抹去..
拿起來的時候也一樣..大概就這樣吧..background太深可能是1抗/2抗沒洗乾淨
band散掉可能是壓片的時候糊到了...
一些小細節注意一下應該就可以跑的很漂亮了...
Good luck...
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