Re: [問題] 有關藍白帶篩選
※ 引述《smallhii (期月考)》之銘言：
: 請問一下各位前輩괳
: 若是在進行對E-coli的transformation
: 但是長出來的E-coli只數十顆(不到30顆)
: 轉殖成功的又只佔不到10顆 orz
: 跟同學的相比 每一個人都幾乎上百顆起跳
: 請問會是我在處理competent cell上時出現問題嗎
competent cell處理時 盡量保持在冰上作業 也盡量保持靜置
加入plasmid後也別拿起來搖 小心的用pipette慢慢吸上吸下2~3下就好
heatshock時間照老師給的講義做(有做過４５秒也有做過９０秒)
heatshoc完盡速插回冰上 不過要輕輕的= =
: 還是plasmid啊 實在想不出什麼原因
plasmid如果是老師給的應該不太可能有問題
: 試劑劑量上都沒有問題 塗盤時也確保都有塗乾
玻棒用酒精燈消毒後 可先壓plate上過一陣子冷卻後再塗盤
避免小菌菌被燙死
: 還會有其它原因嗎 麻煩板上的高手解答
塗盤前看有沒有離心增加菌的濃度 不過通常是不需要
: 小的是新手 謝謝
這是我實驗課的心得m(__ __)m 別鞭太大力
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◆ From: 203.203.182.19
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