Re: [問題] 有關藍白帶篩選
ꄠ 先謝謝這位大大的回答
뀠引述《tsubasawolfy (批踢踢)》之銘言：
: ※ 引述《smallhii (期月考)》之銘言：
: : 請問一下各位前輩괳
: : 若是在進行對E-coli的transformation
: : 但是長出來的E-coli只數十顆(不到30顆)
: : 轉殖成功的又只佔不到10顆 orz
: : 跟同學的相比 每一個人都幾乎上百顆起跳
: : 請問會是我在處理competent cell上時出現問題嗎
: competent cell處理時 盡量保持在冰上作業 也盡量保持靜置
加入plasmid後也別拿起來搖 小心的用pipette慢慢吸上吸下2~3下就好
: heatshock時間照老師給的講義做(有做過４５秒也有做過９０秒)
: heatshoc完盡速插回冰上 不過要輕輕的= =
:
以上都有做到 我們是做45秒鐘 HEATSHOCK完後 放回冰上2分鐘
: 還是plasmid啊 實在想不出什麼原因
: plasmid如果是老師給的應該不太可能有問題
: : 試劑劑量上都沒有問題 塗盤時也確保都有塗乾
: 玻棒用酒精燈消毒後 可先壓plate上過一陣子冷卻後再塗盤
玻棒有用酒精消毒過 再用酒精燈燒 燒完後有冷卻幾秒鐘 才進行塗盤
難道是冷卻時間不夠嗎?? 可是跟同學差不多時間啊
之前做的實驗也都有長成功
: 避免小菌菌被燙死
: : 還會有其它原因嗎 麻煩板上的高手解答
: 塗盤前看有沒有離心增加菌的濃度 不過通常是不需괊: : 小的是新手 謝謝
: 這是我實驗課的心得m(__ __)m 別鞭太大力
實在是想不出原因了 還是麻煩大家告訴小的了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.164.112.175
※ 編輯: smallhii 來自: 218.164.112.175 (04/11 22:15)
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