Re: [問題] 蛋白質表現相關問題~~
※ 引述《realm.bbs@ptt3.cc (realm)》之銘言：
: 這是我第一次做蛋白質表現...
: 我的是帶有his-tag的蛋白質...於E. coli中表現...
: 用Ni-NTA進行純化...
: 目前的問題是...我懷疑是因為表現量太高...所以我的蛋白在pellet的部分...
有時候不是表現量高低的問題
: 就我所知, 透過調整培養條件等等...可以將pellet的蛋白變成在supernatant中...
: 我之前的條件...37度, 0.5 mM IPTG, 6小時
: 我在想...將溫度改成30度...減少IPTG的量...不過不知道該減少到多少...
: induction的時間是否需要調整...
低溫 16度
shake 慢一點 50rpm
IPTG濃度低一點 0.1mM
菌養老一點再induction
加ethanol去誘導HSP產生幫助folding
fusion another tag, such as MBP, GST, Nus
: 因此想請教有相關經驗的大大~~能否提供一些經驗分享~~
: ...另外想問我的觀念是否正確...
: 之所以可以將pellet中的蛋白變到supernatant中...
: 主要是因為透過培養條件的調整, 使蛋白的表現量下降...
: 這樣的觀念對嗎??
: 先謝過~~:)
不完全對
以上有些條件是讓菌長慢一點，藉以讓她產生蛋白質時慢慢地做出來
不過有些對Ecoli來說是有毒的蛋白質
不管怎麼做都是inclusion body
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