[問題] PCR不成功的因素??

看板Biotech (生命科學)作者 (豔陽天.晴)時間19年前 (2006/07/11 18:50), 編輯推噓6(603)
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專題實驗一直在做 PCR 跑膠.. 但是沒有一次成功... 換過primer,重新設定過PCR的溫度 連老師自己操作都做不出來~ 跑膠後甚麼東西都看不到...到今天已經失敗第5次了.. 想請問大家,有麼因素是會影響PCR的結果嗎? (目前我們也懷疑是 水 的純度不夠高) 順便問一下嚕~有沒有甚麼好的網站可以協助我們設計primer呢? (國家衛生研究院嗎?) 謝謝嚕! -- 我的小小天地~ http://www.wretch.cc/album/tzuling0815 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.168.133.38

07/11 18:56, , 1F
加DMSO?
07/11 18:56, 1F

07/11 19:11, , 2F
察看GC值,GC太高可以加DMSO試試看..不要超過總體積5%
07/11 19:11, 2F

07/11 21:27, , 3F
dNTP, buffer或enzyme 等等都有可能出問題
07/11 21:27, 3F

07/11 21:29, , 4F
可以一個一個去試 看問題在哪 不然就全部換新囉
07/11 21:29, 4F

07/12 20:45, , 5F
template是甚麼呢?
07/12 20:45, 5F

07/12 22:54, , 6F
我知道有個軟體vector NTI可以分析序列.設計primer
07/12 22:54, 6F

07/13 19:36, , 7F
cycle數不對.我之前30cycle跑不出來.變35cycle就出來了
07/13 19:36, 7F

07/14 01:31, , 8F
若是RT-PCR的template,quality夠好嗎?若從plasmid或
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07/14 01:33, , 9F
cDNA library,template再稀釋到500,1000倍試試
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文章代碼(AID): #14iu9fjo (Biotech)
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