Re: [問題] 如何利用螢光顯微鏡與CCD照fura-2的相片?

看板Biotech (生命科學)作者Solow (深水)時間19年前 (2006/09/14 21:45)推噓3(3推 0噓 1→)

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※ 引述《paua (waiting for good news)》之銘言： : 我想照的是這種圖, 就是有綠色和紅色分別代表不同的鈣離子濃度 : http://www.moleculardevices.com/pages/software/metafluor_applications.html : 網站下面有寫一些文字, 但我不是很懂, 是不是一定要用兩個照相機, 分別去拍照呀? 看你的影像系統是怎樣的，做鈣離子有兩大系統…(目前看到的) 一種是用飛輪，把濾鏡瘋狂轉動，做不同波長的切換，並用CCD同步擷取影像。讓眼睛可以看到兩種波長，也可以看到活體的影像，但有時飛輪和CCD頻率會豆不起來，這時請不要罵業務，因為這是先天的障礙……(想要跟你彈同調…不可能) 或是用Dual Nipkow-disk(尼氏盤)，這個也很厲害，因為它會更加瘋狂的轉動…XDDD 不過它有更重要的功能就是可以看到像鈣波這種要很即時的影像。但你會被吵死，而且很怕他什麼時候會飛出來打到你的頭……(←並不會^^b) 最重要的是它貴33……(所以我是買不起的酸葡萄 >o<) 回到原題，另一個比較和平的系統是用分光的方法，個人比較推這個，你看網站他下面有寫Dual-Cam，或Dual-View 這是一種雙分光裝置，將兩種波長的光用半反射鏡分開，所以要用到兩顆CCD，最好是同型號的兩顆。到時候再將兩張影像疊在一起，這種方法是比較經濟，但你如何証明你這兩顆CCD擷取光的能力是一樣的？同一個亮點 a CCD說是70%亮，b CCD說75%亮這就麻煩了，除非校正CCD亮度，否則你的ratio image永遠是錯的，但怎麼校正我不知道…(應該可以用軟體修正) 另一個方法做Dual-Cam的那一家公司也有出，分光鏡分光之後把不同波長全打在同一CCD上，把螢幕切成兩邊，各別顯示不同波長，這就解決了CCD亮度校正的問題，但它的問題是CCD影像邊緣會有彎曲現象，聽說你在做影像疊合時會有誤差…… 有一好沒兩好啦……(最重要的，不要4好) : : http://academic.scranton.edu/faculty/GOMEZG2/avianorn.htm : 這個網頁寫著, 利用pseudo color的技術(?) pseudo→假的，偽裝→pseudo color→假的顏色→即電腦填色的意思真實影像大多是用黑白CCD在拍(因為解析度較高)，你看的不是實際的顏色。 : 我現在在看的paper (The journal of cell biology, vol.163, p283-293) : 也有類似的圖片, 在材料方法部份說明作者使用inverted epifluorescence microscope : (Eclipse TE300, Nikon)與CCD camera (Pentamax, Princeton instrument), : 螢光的部份, 則利用340與380 nm波長激發. : 我想請問一般螢光顯微鏡可同時觀察到紅與綠色嗎? : 還是說要分別利用不同的激發光使散射出不同顏色的光, 再將兩張圖片合體(?) : 麻煩請版上的高手幫忙解答這個問題唷 :P 非常感謝啊 ^^ 以上，如有錯誤的地方請海涵。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.160.51.30 ※ 編輯: Solow 來自: 218.160.51.30 (09/14 22:41) ※ 編輯: Solow 來自: 218.160.51.30 (09/14 22:45)